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采用荧光定量PCR方法、酶活性速度测定法,探讨了非酯化脂肪酸(NEFA)对体外培养的牛肝细胞中磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)mRNA丰度及其活性的影响.结果显示,添加1.5 mmol/L和2.0mmol/L NEFA时,PEPCK mRNA丰度显著低于对照组(P<0.05);添加0.5~2.0 mmol/L NEFA时,PEPCK的活性显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)降低.结果表明,NEFA对体外培养的牛肝细胞中PEPCK mRNA丰度和PEPCK酶活性均具有抑制作用. 相似文献
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选取不同日龄肉鸡,通过剪碎法和半原位灌流法分别分离1、15、30日龄肉鸡和成年肉鸡原代肝细胞并进行培养。采用油红O染色检测脂滴存在情况,PAS染色检测糖原分泌情况,免疫组织化学法和间接免疫荧光染色法检测肝细胞特异标记物CK18。结果显示,1日龄的鸡原代肝细胞内脂滴过多,15日龄的鸡原代肝细胞状态欠佳,30日龄和成年的鸡原代肝细胞生长状态和形态良好;原代肝细胞内存在大量的脂滴和糖原,免疫组织化学法和间接免疫荧光染色显示分离的细胞为CK18阳性细胞,即为肝细胞。结果表明,30日龄和成年肉鸡采用半原位灌流法分离得到的细胞纯度高、数量多且状态良好,且分离的肝细胞具备分泌糖原和储存脂质的功能,适合进行体外试验研究。 相似文献
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在原代单层培养的新生犊牛肝细胞培养液中分别加入不同浓度丙酸钠、丙酮酸钠、胰岛素、胰高血糖素和瘦蛋白,培养12 h后,应用半定量RT-PCR方法检测体外培养的肝细胞PEPCK-C mRNA的丰度。结果显示,随着丙酸钠、丙酮酸钠浓度的升高,肝细胞PEPCK-C mRNA的丰度均先升高后下降(P<0.01);随胰岛素、胰高血糖素和瘦蛋白浓度的升高,肝细胞PEPCK-C mRNA的丰度分别剂量依赖性地降低、升高(P<0.01)和无显著变化。表明,丙酸钠、丙酮酸钠能通过上调体外培养的新生犊牛肝细胞PEPCK-C mRNA的表达而促进肝糖异生代谢,但上调作用是有限的;胰岛素能通过下调体外培养的新生犊牛肝细胞PEPCK-C mRNA的表达而抑制肝糖异生代谢,且下调作用呈剂量依赖性;胰高血糖素与胰岛素作用刚好相反;瘦蛋白未起直接的调节作用。 相似文献
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目的 探究化浊解毒方治疗慢性肾功能衰竭(chronic renal failure, CRF)的机制。方法 将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、尿毒清组、氯沙坦钾组、化浊解毒组,采用5/6肾切除术复制CRF模型。模型复制后连续干预12周,苏木精-伊红染色后光学显微镜下观察肾脏组织形态学变化,分别采用Western blot法、RT-PCR法检测肾组织转化生长因子β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor, HGF)蛋白及其mRNA的表达水平。结果 与对照组比较,模型组大鼠血清肌酐(serum creatinine, SCr)、血尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)和肾组织TGF-β1、HGF、α-SMA蛋白及其mRNA表达水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,尿毒清组、氯沙坦钾组、化浊解毒组大鼠SCr、BUN及肾组织TGF-β1、α-SMA蛋白及其mRN... 相似文献
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在对照组(Cu 11 mg/kg,A组)基础上设高铜组3个(110 mg/kg、220 mg/kg和330 mg/kg,分别对应为试验组B、C、D),试验期为60 d,在12、24、36、48、60日龄采集肝组织,提取线粒体,测定线粒体复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ的活性变化.结果表明,11 mg/kg和110 mg/kg铜日粮添加组线粒体复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ的活性呈增加趋势.220 mg/kg和330 mg/kg铜日粮添加组肉鸡肝细胞线粒体复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ活性减弱,但主要在试验后期,尤其是48日龄之后,比对照组和各组内的试验前期下降明显(P<0.05).说明高铜日粮在一定程度上对线粒体复合物活性是有利的,但过高的铜添加到日粮中(≥220 mg/kg)可降低肉鸡肝细胞线粒体呼吸链复合物的功能活性.据此可以推测,线粒体是机体铜过量状态下侵害的靶部位之一,而且能作用于线粒体各个复合物,造成线粒体呼吸功能减弱,呼吸链中电子传递发生故障,从而影响线粒体功能的正常发挥. 相似文献
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辛硫磷对大鼠肝细胞凋亡的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
通过给大鼠肝细胞培养液中加入辛硫磷(染毒终浓度分别为3、10、30、100和300 μmol/L)染毒,于12、24 h后用流式细胞仪分别测定细胞凋亡率、细胞死亡率和细胞内活性氧(ROS)水平,并在扫描电镜和荧光显微镜下观察细胞凋亡情况,研究了辛硫磷对原代培养大鼠肝细胞凋亡的影响.结果显示,辛硫磷具有明显的细胞毒性,在3~100 μmol/L范围内随着染毒剂量的增大和染毒时间的延长,细胞死亡率、凋亡率和ROS水平显著升高,且发生了明显的细胞凋亡的形态学变化;但300 μmol/L辛硫磷培养24 h,肝细胞凋亡率和ROS水平下降,死亡率升高.表明辛硫磷对肝细胞有直接的毒性作用,并通过产生ROS诱导了肝细胞凋亡. 相似文献
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提取早花期和盛花期狗舌草中双稠吡咯啶生物碱(PAs),分别按100mg/kg给2组SD大白鼠腹腔注射。结果表明,2个时期狗舌草中PAs对SD大白鼠均具有很强的肝毒性和一定的肺毒性及中枢神经毒性,以盛花期狗舌草中PAs的毒性较弱;同时发现狗舌草对心、肾也具有一定的毒性作用。 相似文献