鸡柔嫩艾美球虫子孢子表面抗原基因λMzp5-7在Hela细胞中的表达

将已构建的柔嫩艾美球虫(Eimeria tenella)子孢子表面抗原pMD-Mzp5-7基因片段定向亚克隆到核酸疫苗载体pVAX1上,构建了真核表达载体pVAX-Mzp5-7,酶切鉴定正确后,用脂质体介导的转染法转染Hela细胞,进行了体外表达;并用裸DNA质粒经肌肉接种鸡体内表达。经Western-blotting及RT-PCR鉴定,表明该基因在Hela细胞及鸡体内均获得表达,并有一定的反应原性。     

猪T细胞受体β链CDR3的多样性及其分子结构的遗传特征

通过带谱分型技术研究临床健康猪T细胞受体(TCR)β链CDR3的谱型种类及多样性,并对其序列进行生物信息学分析,以探究CDR3分子结构的遗传特征。结果显示,20个TRBV家族在3头猪中均有表达,且大部分TRBV家族CDR3的谱型呈现类高斯分布,具有丰富的多样性;同一个体中不同TRBV家族CDR3出现的频次相差较大,同一TRBV家族在不同个体中出现的频次也不相同;100多条猪TCRβ链基因序列的CDR3分析发现,其大小在33~66nt之间,出现频次最多的序列为第42位碱基;在CDR3核苷酸序列组成中,鸟嘌呤的含量较高,推测其编码甘氨酸的频次较高;TCRβ链CDR3的两侧由相对保守的氨基酸组成,中间部分氨基酸变化较大,其中在第5位和第8位的氨基酸组成差异最大,确认CDR3的多样性和复杂性主要由D区两端的N插入序列及拼接时的灵活性造成。本研究结果为T细胞TCR分子的功能复杂性与特异性研究提供了一定的理论依据。     

大鼠骨骼肌损伤后PMN、MNC及FBC百分率与损伤时间关系

目的：研究大鼠骨骼肌机械性损伤后不同时间点多形核白细胞（polymorphonuclear leucocytes , PMN）、单个核细胞（mononuclear cells,MNC）及成纤维样细胞（fibroblastic cells,FBC）百分率的变化。方法建立大鼠骨骼肌机械性损伤动物模型,随机分为伤后6h、12h、1d、3d、7d、10d、14d及正常对照组。应用HE染色法和图像分析检测大鼠骨骼肌损伤后不同时间点PMN、MNC及FBC百分率。结果伤后6~12 h,损伤区内可见PMN和MNC浸润,PMN百分率达到峰值;伤后1 d,损伤区内主要以MNC浸润为主,MNC百分率达到峰值,而PMN百分率开始下降;伤后3~7 d,FBC百分率开始逐渐增加,PMN和MNC百分率则逐渐下降;伤后10~14 d,FBC百分率达到峰值。结论大鼠骨骼肌损伤区内PMN、MNC及FBC百分率呈时间规律性变化,有望成为骨骼肌损伤时间推断的参考指标。     

牛轮状病毒VP7基因在昆虫细胞中的表达

利用PCR方法扩增出牛轮状病毒外衣壳蛋白VP7基因,经BamHⅠ+PstⅠ特异性酶切后,连接于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTA中,成功构建了重组质粒pFastBacHTA-VP7。该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10BAC感受态细胞,经抗生素筛选和PCR筛选,获得转座的杆粒Bacmid-VP7。在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒,再感染细胞,收获目的蛋白,对表达的蛋白进行SDS-PAGE分析和Western-blot分析。结果显示,成功扩增了VP7基因,大小为981bp,所表达的重组蛋白大小为40.4ku,与预期值相符,该蛋白能与牛轮状病毒阳性血清发生特异性反应,具有较好的反应原性。此研究结果为进一步研发牛轮状病毒ELISA检测试剂盒奠定了物质基础。     

大鼠皮肤切创愈合过程中Cygb及HIF-1α mRNA的表达

目的探讨皮肤切创愈合过程中Cygb及HIF-1αmRNA表达的相关性及时间变化规律。方法 60只健康雄性SD大鼠随机分为9个实验组和1个正常对照组,建立大鼠皮肤全层切创模型,实验组分别于术后0、1、3、6、12、24、48、72、96h脱颈处死大鼠,提取创周皮肤总RNA,采用实时荧光定量PCR技术检测Cygb及HIF-1αmRNA的表达,实验组与对照组及各组间进行比较分析。结果 Cygb与HIF-1αmRNA创伤后表达的总体变化趋势基本一致,均于伤后12h首次达峰,分别为对照组的1.6倍和5.4倍(P<0.05);随后下降,并分别于伤后48h、72h再次升高,至96h达对照组的2.8倍和5.6倍(P<0.05)。结论大鼠皮肤切创愈合过程中Cygb与HIF-1 mRNA的表达呈现时序性变化且有一定的相关性,可作为皮肤损伤时间推断的指标。     

潍坊地区六种常见嗜尸性蝇类mtDNA COI区序列研究

目的解决蝇类成虫、蛹和蛆快速、准确鉴定的难题。方法随机采集潍坊地区人尸周围环境中的蝇类成虫、蛹和蛆,提取其mtDNA,经PCR扩增、产物检测与纯化、测序等,比较其序列差异。结果六种常见嗜尸性蝇类相互之间序列差异明显,同一种蝇的成虫、幼虫、蛹之间未见差异。结论mtDNACOI区序列分析可作为法医学嗜尸性蝇类种属鉴别的可靠方法。     

大鼠博落回总碱中毒心肌细胞凋亡的研究

目的观察博落回总碱中毒后大鼠不同时间内心肌细胞凋亡情况,为博落回总碱中毒提供毒理学指标。方法以SD大鼠博落回总碱中毒为实验模型,通过HE染色及凋亡细胞检测技术对大鼠博落回总碱中毒后心肌病理变化进行研究,并对研究结果进行计算机病理学图像分析。结果大鼠在中毒后的不同时间段内,心肌细胞凋亡数高于正常对照组(P<0.01),且凋亡数在不同时间段差异有显著性。结论博落回总碱中毒在临床症状不明显及毒物分析难以检测的情况下,应用凋亡细胞检测技术可成功检测出心肌的病理学变化。     

丝光绿蝇COⅡ序列分析与地理种群分布的关系

目的探讨不同地理种群丝光绿蝇遗传距离与所处地理纬度差异分布的相关性,为法医学判断丝光绿蝇所属地理种群及推断死亡地点服务。方法采集于呼和浩特和成都地区2个地理种群4个丝光绿蝇,对其线粒体DNA(mtDNA)上细胞色素氧化酶亚单位Ⅱ(COⅡ)基因中635bp序列进行分析;同时通过GenBank中BLAST检索系统检索世界不同地理纬度地区的6个地理种群的6个丝光绿蝇该区域的mtDNA序列,用MEGA2.1软件包进行序列分析和构建系统发育树,并将分析所得各苍蝇间的遗传距离与地理纬度差值运用SPSS10.5统计软件进行回归和相关分析。结果8个地理种群丝光绿蝇mtDNA上COⅡ中635bp基因序列分析所得遗传距离与地理纬度差值之间存在相关性(r=0.286,P=0.034)。结论8个地理种群丝光绿蝇mtDNA上COⅡ中635bp基因序列分析所得遗传距离与所处地理纬度差异分布之间存在相关性。     

毒鼠强中毒的凋亡细胞研究

目的通过动物实验,研究观察在不同剂量下毒鼠强中毒后不同时间各器官的病理学变化,以期为法医学鉴定提供指标。方法建立小鼠毒鼠强中毒的实验模型,通过常规H.E染色及凋亡细胞检测技术对小鼠毒鼠强急、慢性中毒后脑、心、肝、肾等器官的病理学改变进行系统研究,并对研究结果进行计算机病理学图像分析;对中毒实验组的小鼠上述器官检材进行毒物分析。结果慢性中毒组小鼠在中毒后的不同时间段内,脑、心、肝、肾等器官凋亡细胞数均高于正常对照组及急性中毒致死组,且同一器官的凋亡细胞数在不同中毒时间段内有所差异,差别均有显著性;不同器官的凋亡细胞数的峰值在不同中毒时间段内亦有所不同。急性中毒组小鼠各器官的毒物分析结果为阳性,慢性中毒组均为阴性。结论慢性毒鼠强中毒,在临床症状不明显及法医毒物分析难以检测的情况下,应用凋亡细胞检测技术可成功检测出机体的主要器官的病理学改变,表明小剂量、慢性中毒对机体仍有一定的影响。