禽呼肠孤病毒σB基因在杆状病毒表达系统中的表达与鉴定

本研究旨在通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达具有生物学活性的禽呼肠孤病毒σB蛋白。首先,根据NCBI中ARVσB基因序列,设计引物构建σB基因重组供体质粒pFast-σB。随后转化DH10bac感受态细胞,筛选获得重组穿梭质粒Bacmid-σB。通过脂质体介导法转化sf9细胞,获得重组杆状病毒rBac-σB。将重组病毒感染sf9细胞,表达重组蛋白。通过SDS-PAGE、Western-blot和间接免疫荧光(IFA)检测表明,ARVσB蛋白在sf9细胞中成功表达,分子量约为41 ku,并具有良好的生物学活性,为进一步研究ARVσB基因的功能及其基因工程亚单位疫苗的研究奠定了基础。     

食物残渣STR分型破案1例

1 案例 1.1 案情简要 2012年6月下旬至9月上旬,某辖区内先后发生多起入室盗窃案,受害人早上离家外出务工,晚上回家时发现家中被盗.勘验人员在不同的现场分别提取到1.7cm×2.1cm咀嚼过的油条食物残渣1份和咬嗑的瓜籽壳11粒,所有物证均在案发当天提取,第二天送至DNA室,受理后立即进行DNA检验.     

口腔脱落细胞DNA检验用于侦破命案1例

1 案例 某日凌晨,某区夜摊发生一起故意杀人案.死者胡某与两女友在夜摊吃夜宵时,嫌疑人张某等4人在邻桌喝酒,见胡某有两女友陪伴并有说有笑,心生妒忌,便围过去用刀刺伤胡某胸部.胡某起身逃跑,在离现场不到100m处倒地身亡,嫌疑人张某等4人行凶后立即逃离现场.     

利用EZ—tape提取DNA破案1例

1案件简介 某年5月某日，某郊区发现一具无名男尸，经勘验系他杀。死者穿着符合流浪拾荒人员，死者全身无开放性损伤，背、臀部有多处木棒类钝器伤，现场未发现有价值的物证线索。经排查，发现现场附近看护房看管员张某有重大嫌疑，从看护房内提取断裂杨树木棍一根。     

天才少年的惊人发明

如何早期检测"癌王"胰腺癌,一直是医学界苦思冥想亟需攻克的难题,不料,15岁的美国少年杰克·安卓卡告诉人们,这个问题很简单。简单一招攻克医学难题2007年,世界三大著名男高音之一的意大利歌手帕瓦罗蒂因患胰腺癌不治辞世,这距离他病情确诊不过短短一年时间。2009年,曾主演《人鬼情未了》的美国演员帕特里克·斯威兹在力抗胰...     

剥开粘合的细胞之书

"炮制"万能干细胞嬴了2012年诺贝尔生理学或医学奖,人体重塑不再是个梦。在电影《终结者》中,有一个邪恶的液态机器人,它可以随意将身体化成水银一般纯纯的液体,在流过狭窄的窗缝之后,又可以再塑人体。我不知道,这里面是不是隐含了编剧对人类形态的一种渴望。人体能否重塑?这是一个极具诱惑力的问题。2012年的诺贝尔生理学或医...     

天才少女死亡之谜

今夜爸爸你别再走动裹紧你的衣裳晚上的风会冻僵苍白的星光从灯光的背后我能看见你的脸上挂着两个人的泪我仿佛回到记忆里流淌的时光如同奔跑的少年来不及回头却留下了守望于是,美好永远定格在昨天……     

鹅γ-干扰素基因真核表达载体的构建及在幼仓鼠肾细胞中的表达

将克隆在pMD18-T载体中的鹅IFN-γ基因插入真核表达载体pcDNA3.1(+),得到真核表达质粒pcDNA3.1(+)-IFN-γ,经测序鉴定后,在室温条件下,质粒pcDNA3.1(+)-IFN-γ浓度20μg/mL,体积400μL,幼仓鼠肾细胞(BHK-21)细胞密度1×106/mL,电穿孔仪参数设为电压425 V、电容25μF、连续脉冲2次转染BHK-21细胞,待细胞贴壁后经过浓度为600μg/mL的G418连续筛选14 d后,出现抗性细胞克隆,将阳性BHK-21细胞上清液进行Western-blot鉴定,检测结果证明鹅IFN-γ在BHK-21细胞中得到表达。     

隐孢子虫鼠基因型CP15基因真核表达质粒的构建及在Hela细胞中的表达

为了构建隐孢子虫鼠基因型CP15基因的重组真核表达质粒,检测其重组质粒在Hela细胞中的表达。采用PCR方法,从pMD18-T-CP15菌液中扩增了CP15及含寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)的CP15基因,酶切测序鉴定;将该基因亚克隆至pVAX1载体中,用脂质体介导的方法转染Hela细胞,RT-PCR法、间接免疫荧光法和Western-blot法检测表达蛋白的生物学活性。结果显示,扩增了约360 bp和380 bp的隐孢子虫鼠基因型CP15和含CpG-ODN的CP15基因,酶切测序鉴定成功构建了pVAX1-CP15和含有CpG-ODN的重组真核表达质粒pVAX1-C-CP15。转染Hela细胞后,用RT-PCR法检测到外源基因有效的转录,用间接免疫荧光、SDS-PAGE和Western-blot法检测到外源基因的有效表达。结果表明,构建的重组真核表达质粒能够在Hela细胞中成功转录和表达,并且表达产物具有良好的免疫活性。这为下一步深入研制具有高保护性的隐孢子虫核酸疫苗奠定了基础。