荧光钙血迹蓝钠试剂增强潜在多介质混合鞋印的应用

目的研究荧光钙血迹蓝钠试剂增强潜在灰尘水渍混合鞋印、灰尘尿渍混合鞋印、灰尘血渍混合鞋印的普适性。方法采用高压微雾雾化法,雾化增强常见的8种地板上的20%w/w灰尘含量的灰尘水渍、灰尘尿渍和灰尘血渍混合鞋印,并与平面扫描提取技术相比较。结果增强后的鞋印花纹清晰,呈亮蓝色,提取效果明显优于自然光下拍照提取,略优于平面扫描提取技术。结论荧光钙血迹蓝钠试剂能够有效增强潜在多介质混合鞋印,是一种便捷高效的潜在混合鞋印增强提取方法。     

夯实基础 激发活力 推动“平安家庭”创建工作不断深化

2004年,山东省妇联在全国率先开展了“平安家庭”创建活动。几年来,我们紧紧围绕稳定工作大局,以实现“六防”、“六无”为目标,以部门合作联动为保障,将维稳与维权有机结合,推动“平安家庭”创建活动不断创新发展。“平安家庭”创建已成为平安山东建设大局中的亮点和品牌。     

建成高标准镇乡便民服务中心

村“两委”班子、村干部工作绩效如何,党员表现如何,称不称职,群众心中自有一杆秤。2008年以来,贺兰县在全县61个村开展了以村“两委”班子和班子成员向党员群众承诺,党员向党组织和群众承诺;党务公开、村务公开;党员群众评议村“两委”班子和班子成员,党员群众评议党员为主要内容的“双承诺双公开双评议”活动。     

坚持崇尚实干的用人导向——激发基层干部创业激情

省委书记刘奇葆指出：推进经济社会叉好又快发展、实现全面建设小康社会的宏伟目标,关键在于各级干部保持干事创业的激情和锐气。做到这一点,必须鲜明地坚持崇尚实干的用人导向,确保想干事的有机会、肯干事的有平台、干成事的有前途。一方面要严格要求干部保持求真务实、真抓实干的作风,做到言必责实、     

分类管理:激发大学生村官活力

近年来,辽宁省义县为有效激发大学生村官干事创业的活力,对先后到村任职的149名大学生村官进行分类管理,取得了良好效果。分类管理,即根据每名大学生的能力特点对其科学分类,进行有针对性     

绵羊血浆阿维菌素荧光高效液相色谱检测法的建立

建立了一种绵羊血浆中阿维菌素 (AVM )荧光高效液相色谱 (HPLC)检测法。用甲醇提取绵羊血浆中的AVM ,并用ODS C18固相萃取法进行纯化 ,纯化后的AVM经干燥处理后 ,用三氟乙酸酐和N 甲基咪唑对其进行荧光衍生化 ,用荧光HPLC进行检测。本方法的最低检测限为 0 .1ng/mL ,在血浆AVM含量 2 .5～ 5 0 .0ng/mL范围内 ,标准曲线方程为Y =2 72 12x -10 412 (r =0 .9995 ) ,样品的平均回收率为 92 .0 2 %± 6.3 3 %。批内变异系数 1.98%～ 6.2 2 % ,批间变异系数 2 .3 1%～ 8.94%。检测结果显示 ,本方法灵敏度高 ,干扰少 ,重复性好。     

反向表达狂犬病病毒糖蛋白的重组伪狂犬病病毒Bartha-K61株的构建

为构建以伪狂犬病病毒(PRV)Bartha-K61株为载体的反向表达狂犬病病毒(RV)糖蛋白(rgp)的重组活载体疫苗,将EGFP-rgp的表达框克隆入p8-AA载体的Sph Ⅰ/Nde Ⅰ酶切位点处,经酶切鉴定为反向连接,阳性重组子命名为p8AA-EGFP/rgp.在质脂体介导下将该质粒与Bartha-K61共转染PK-15细胞,获得rPRV/EGFP/rgp重组病毒.对纯化后的重组病毒进行RT-PCR、Western-blot和间接免疫荧光鉴定.结果表明,重组病毒的效价(TCID50)为108.25/mL;外源基因在细胞内得到了有效的表达,并具有良好的免疫反应性和遗传稳定性.     

猪轮状病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

根据GenBank中登录的A群猪轮状病毒(PoRV)代表株OSU毒株序列,针对VP7基因设计了1对特异性引物,将150bp目的片段与pMD18-T载体连接构建标准品,建立了检测A群PoRV的SYBR GreenⅠreal-timePCR方法,并对该方法的敏感性、特异性和重复性进行了评价。结果显示,该方法在1.3×108copies/μL～1.3×102copies/μL范围内线性关系良好,相关系数为0.999;最低检测限为1.3×101copies/μL;用该方法检测猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪病毒性腹泻病毒均为阴性;批内及批间变异系数均低于2%。表明,该方法敏感性高、特异性强、重复性好。用该方法抽检58份疑似病例的腹泻病料,结果检出53份阳性,同时用普通RT-PCR和快速检测试剂盒对这些病料进行检测,结果分别检出42份和32份阳性。用这3种方法对11例已知阳性的临床粪便样品进行检测,结果建立的检测方法与其他两种方法的符合率为100%。用该方法检测PoRV细胞培养物中的病毒载量为1.0×105copies/μL。结果表明,建立的检测方法为PoRV的早期诊断、分子流行病学调查以及疫苗质量的监测等提供了新的快速检测技术。     

猪血凝性脑脊髓炎病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立

根据GenBank中的猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)S蛋白基因的保守序列设计合成1对特异性引物,经PCR扩增S基因并构建含有该基因片段的重组质粒,将该重组质粒作为阳性标准品,建立了检测HEV的SYBR Green Ⅰ real-time PCR方法。结果显示,该方法线性关系良好,相关系数为0.994;敏感性高,检测下限为1.6×104 copies/μL;特异性强,与牛冠状病毒、伪狂犬病病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒不发生交叉反应;并且重复性好,组内、组间的变异系数均小于2%。应用该方法对采集的20份疑似HEV感染病料进行检测,其中16份为阳性,而用常规PCR检测同样的样品,仅8份为阳性。表明建立的SYBRGreen Ⅰ real-time PCR方法具有快速、特异、敏感、重复性好等优点,可用于临床上HEV的检测及定量分析。     

表达新城疫病毒F基因的重组鸡痘病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

采用荧光染料SYBR Green渗入法,通过对real-time PCR反应条件进行优化,建立了real-timePCR检测方法,用该方法定量分析新城疫病毒(NDV)F基因在重组鸡痘病毒(rFPV-F-VP0)第1、5、10、15、20代次中的表达整合情况。结果表明,建立的标准曲线呈现良好的重复性和特异性,与模板浓度呈现良好的线性关系。在线性浓度范围内,随着模板量的减少,其对应的Ct值相应增大,0.99<相关系数(r2)<1,0.8<扩增效率(E)<1.2,熔解曲线为单一特征峰型。本试验精确定量了外源基因在重组鸡痘病毒中的表达水平,为阐明重组鸡痘病毒的表达机理提供了理论基础。