副猪嗜血杆菌转铁结合蛋白A基因的原核表达与鉴定

为获得副猪嗜血杆菌(HPS)转铁结合蛋白A基因(tbpA)的表达产物,根据GenBank发表的HPS(SH0165株)tbpA的核苷酸序列设计合成1对特异性引物,以HPS血清13型安徽分离株(LJ3)的基因组DNA为模板,利用PCR扩增tbpA基因,然后将其克隆至pET-SUMO载体,构建重组原核表达质粒pET-SUMO-tbpA,通过PCR鉴定和测序确认,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)中,并进行IPTG诱导表达和His-Ni-resin纯化目的蛋白。经SDS-PAGE检测,获得了110ku的表达产物,与预期大小的转铁结合蛋白A(TbpA)的分子质量一致。Western-blot分析表明,表达产物与HPS阳性血清能发生反应,显示表达产物具有良好的免疫活性。结果表明,成功表达的TbpA为研制HPS新型疫苗和诊断试剂奠定了基础。     

试析公安机关新世纪新阶段面临的挑战和风险

新世纪、新阶段公安机关面临的主要挑战包括：“三股势力”的破坏活动进一步加剧;犯罪活动进一步升级;群体性治安事件复杂多变;执法环境进一步变化等。为此,应采取相应的对策,如完善情报信息,实施综合打防;不断创新警务机制,有效应对社会治安;树立大局意识,稳妥处置群体性治安事件;严格规范警务工作内容,切实弘扬社会主义法制精神;完善法律、法规,强化治安综合治理;实施队伍长效管理,切实提升队伍素质;重视警察公共关系的建设等。     

论徇私舞弊低价折股、出售国有资产犯罪案件侦查

侦查徇私舞弊低价折股、出售国有资产犯罪案件,要注意区分罪与非罪的界限,根据 案件的特点,选择正确的侦查途径,采取多种措施和策略,侦查取证,以打击犯罪。     

A型H1N1及H3N2亚型流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立

根据A型H1N1亚型流感病毒2009年北美变异株和H3N2亚型流行株的基因序列,设计了3套特异性引物、TaqMan探针,分别用不同的荧光基团标记,以构建的A型流感病毒及H1N1和H3N2亚型流感病毒基因重组质粒作为阳性对照,经反应条件优化,特异性、敏感性和重复性试验,筛选出3套不同的反应体系及同一个反应参数,建立了可同时检测A型流感病毒、H1N1和H3N2亚型流感病毒的实时荧光RT-PCR方法。结果表明,该方法可特异地检测H1N1(人源、猪源)、H3N2(猪源),禽流感病毒H5、H9等A型流感病毒,且与新城疫病毒、减蛋综合征病毒等其他病毒不发生交叉反应,具有特异、敏感、重复性好、快速、费用低廉等优点,试验耗时仅3h。表明,建立的方法,一次试验即可完成A型流感病毒的初筛和H1N1、H3N2亚型流感病毒的初步确认定型。     

双酚A对雄性小鼠睾丸发育和生殖激素分泌水平的影响

为研究不同剂量的双酚A(BPA)对雄性小鼠生殖系统的损伤作用,将25g左右的雄性小鼠40只随机分成对照组、BPA(10、50、100mg/kg)染毒组,每组10只,连续7d对小鼠腹腔注射BPA,对照组注射等量的橄榄油,1次/d,染毒结束后摘取并称量大鼠睾丸、附睾质量并计算脏器指数;光镜检测睾丸病理学改变;酶联免疫法检测血中睾丸酮、黄体生成素水平。结果显示,与对照组相比,小鼠睾丸重量、附睾重量及其脏器指数显著降低(P0.05,P0.01);双酚A组中的曲细精管部分支持细胞与生精细胞分离,生精细胞松散,无规律,各层细胞发生紊乱;随染毒剂量的增加,小鼠血清中睾丸酮和黄体生成素的含量逐渐降低,50mg/kg和100mg/kg两个剂量组睾丸酮和黄体生成素的浓度与对照组相比差异极显著(P0.01)。结果表明BPA可引起雄性小鼠生殖系统的损伤。     

细胞自噬相关蛋白ATG9A对口蹄疫病毒侵入的影响

为揭示细胞自噬相关蛋白9A(ATG9A)对口蹄疫病毒（FMDV）复制的影响,利用IFA、RT-qPCR和Western-blot等方法检测FMDV与ATG9A的共定位情况以及病毒感染对ATG9A的影响;通过构建ATG9A重组表达质粒和合成小干扰RNA,检测过表达及敲降ATG9A对FMDV吸附、内化、基因组复制、蛋白翻译、子代病毒粒子产生的影响。结果显示,FMDV感染后与ATG9A共定位且抑制ATG9A的表达;ATG9A不影响FMDV的吸附,但极显著地抑制FMDV的内化过程;同时,过表达（或干扰）ATG9A能够在RNA与蛋白水平显著降低（或提高）FMDV的增殖和子代病毒粒子产生的能力。结论,ATG9A抑制FMDV的复制,为深入认识FMDV在细胞内的复制周期提供了线索。     

我国猪A型塞内卡病毒的流行现状及诊断技术的研究进展

A型塞内卡病毒（Senecavirus A,SVA）是一种新发生的猪水疱性传染病病原,被感染猪的临床症状为口鼻及蹄冠部水疱性损伤、跛行、厌食、仔猪腹泻甚至急性死亡等。这与猪的口蹄疫、水疱病、水疱性口炎的临床症状非常相似,临床上难以鉴别诊断,只能依赖实验室确诊。近年来,在美国、加拿大、中国等多个国家发生猪塞内卡病毒病,似乎正在成为一种全球性流行的猪病,给养猪业带来了不同程度的经济损失和潜在威胁。本文对我国猪塞内卡病毒的流行现状及诊断技术的研究进展进行了综述,以期为该病的科学防控提供参考。     

A型塞内卡病毒的分离与鉴定

为了确定2020年河南某猪场水疱性疾病的病因,通过提取发病猪的水疱皮样品的RNA,用RT-PCR方法初步检测,经BHK-21细胞分离培养病毒,进一步用间接免疫荧光试验(IFA)鉴定;利用蚀斑形成试验及病毒一步生长曲线,分析病毒分离株的增殖特性;RT-PCR方法扩增全基因组序列,进而构建基于P1基因的系统进化树。RT-PCR鉴定结果表明,猪场水疱性疾病的样品中只有A型塞内卡病毒(SVA)核酸呈阳性;细胞分离和IFA鉴定结果表明,成功分离到的1株病原为SVA,并命名为SVA/HN/2020,该分离株能够与SVA免疫家兔多抗发生特异性反应;蚀斑试验和病毒一步生长曲线结果表明,该毒株能够在BHK-21细胞层上形成蚀斑,并在感染后的第16小时病毒滴度达到最高为1×10^9.5TCID₅₀/100μL;全基因组测序结果表明,该毒株基因组全长7 279 bp(不含Poly A),开放阅读框为6 546 bp,可编码含2 181个氨基酸残基的多聚蛋白;其中P1基因大小为2 574 bp,其核苷酸序列分析显示,该分离株与在我国分离的SVAHB/CH/2016和S...     

A Long Way Back From 2004 to 2020

In the early hours of the morning in Shanghai,2004,a man pulling a three-wheel cart cycles through the streets.Hunched over his handlebars,he meanders through the jumble of alleyways crowded with furniture being sold by elderly couples.     

美国控制股东信义义务:本原厘定与移植回应

控制股东信义义务"移植论"存在方法论误用的缺陷,过度关注概念和规则的译介,而未深究其制度功能所关联的特定社会背景。信义义务根植于普通法特殊的历史土壤,以信托为"母体"并经归纳推理不断扩张泛化,"控制股东信义义务"是这种泛化现象的缩影,早期"受益人利益最大化"内涵已被"公平交易义务"取代。内涵演变的动因是对公司本质认知的进化以及因之发生的个人法向团体法逻辑的持续递进。我国控制股东滥权现象的主要成因并非规范资源不足,转轨时期"政企不分"的现实和公司法体系二元区隔的倾向亦不容忽视。美国关于交易公平性判断的程序性规则有助于克服法律行为评价系统的局限性,具有"复原"商业决策背景的功能,契合复杂的市场环境需求,是最具借鉴价值的部分。