鸡传染性支气管炎病毒纤突蛋白基因的反转录－聚合酶链反应研究

根据国外报道的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｇｒａｙ株的纤突蛋白（Ｓ１）核苷酸序列，自行设计合成了Ｓ１蛋白主要抗原决定簇基因两侧的一对引物，其跨幅为１．０ｋｂ。用该引物对从内蒙古、天津、山东等地分离的３株ＩＢＶ进行ＲＮＡ提取，经反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）后用琼脂糖凝胶电泳分析。结果表明，３个毒株均获取了与预期一致的ＰＣＲ产物。灵敏度测定结果表明，ＰＣＲ方法可检测出１０ｐｇ的模板     

工商部门治理商业贿赂研究

如果说普通民众还没有感受到商业贿赂的直接伤害,执法部门却必须提高警惕。对商业贿赂施以任何形式的姑息、迁就或者同情,都将是在纵容商业贿赂,而商业贿赂便会像某种传染性疾病一样传播、蔓延开来。     

猪传染性胃肠炎病毒四川株的分离鉴定及其S基因的克隆和序列分析

通过核酸类型试验、脂溶性敏感试验,鉴定了1株分离自四川某猪场腹泻病猪粪便的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)。经电子显微镜观察,可以看到大小约90 nm的病毒粒子;通过中和试验,将病毒细胞液与TGEV超免疫血清进行中和反应,显示较高的中和抗体效价。根据GenBank中的TGEV序列,设计了1对包含TGEV S基因1 760 bp部分片段的引物,经RT-PCR扩增获得了1条约1.8 kb的条带,通过低熔点琼脂糖凝胶纯化回收该片段后,将其连接在pMD 18-T载体上,转化DH5α大肠埃希氏菌,用双酶切和PCR对重组质粒进行鉴定并测序,经用DNAStar软件进行同源性分析和多重序列比较,TGEV四川株(SC-A)与国外报道的部分TGEV分离株具有高达98.8%的同源性。     

传染性腔上囊病病毒VP2基因表达条件的优化

用摇瓶培养法,对用作生产传染性腔上囊病基因工程亚单位疫苗的基因工程菌种BL21/pET28a VP2的表达条件进行了优化研究。其结果为:温度 37 ℃,诱导表达时间 3~7 h,用乳糖诱导时终浓度为20 mmol/L时即达到最高表达量;用IPTG诱导时终浓度为0.33 mmol/L时即达到最高表达量;乳糖的诱导效果优于IPTG。     

中国诺如病毒性胃肠炎的流行病学研究:疾病负担和基因型分布

诺如病毒(noroviruses, NoVs)在我国,尤其是在2 岁以下的儿童和65 岁以上的老年人群中,造成了相当大的疾病负担。由于疫情频发,公众对诺如病毒感染的认识逐步增强。食品供应和环境中广泛存在诺如病毒,这可能使诺如病毒的传播无处不在。鉴于诺如病毒具有高度传染性、易引起暴发、环境存活能力强等特性,疫苗接种是控制诺如病毒感染的最有效策略。     

鸡肾型传染性支气管炎病毒的分离及初步鉴定

河南一些养鸡场爆发流行以呼吸道症状为临床特征，以肾脏肿胀、尿酸盐沉积为病变特征的传染病。从典型病例的肺、肾中分离出一株病毒，通过鸡胚接种盲传５代，结合雏鸡回归试验、胰酶及磷酸酯酶处理鸡红细胞凝集试验，与Ｔ＿４标准阳性血清鸡胚病毒中和试验、琼脂扩散试验，证实分离物为Ｔ＿４株肾型传染性支气管炎病毒。     

牛传染性鼻气管炎间接ELISA诊断方法的建立

以牛肾细胞系(MDBK)培养牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)Bartha Nu/67株,经超速离心纯化病毒,再经超声破碎处理后作为诊断抗原,建立了检测牛血清IBRV抗体的间接酶联免疫吸附试验。该ELISA的判定标准为:血清D490 nm值大于0.369的判为阳性,小于0.295的判为阴性,在0.295与0.369之间的为可疑。特异性和重复性试验结果表明,该方法特异性高、重复性好。与法国进口ELISA抗体诊断试剂盒比较,其符合率为96.3%;与中和试验比较,符合率为95.8%,且敏感性更高。应用该诊断方法调查了我国部分地区IBRV的感染情况,结果显示,这些地区的IBRV感染率为67.1%。     

传染性腔上囊炎疫苗免疫鸡TLR7基因表达的动态变化

给11日龄雏鸡分别口服接种鸡传染性腔上囊炎(IBD)弱毒疫苗(法贝灵,IBD-Blen)1和3头份后,于不同时间采集脾和腔上囊组织,分离纯化淋巴细胞,常规方法抽提总RNA,以鸡β-actin基因为内参,采用半定量RT-PCR法检测两种组织中鸡Toll样受体7(ChTLR7)基因的表达动态。结果显示,接种IBD弱毒疫苗前,试验鸡脾和腔上囊组织中均有ChTLR7的微量表达,疫苗接种后第7 h,脾中ChTLR7 mRNA的表达开始显著上调,至接种后第12 h达峰值,此后迅速下降,至第130 h时降至疫苗接种前的水平;而腔上囊组织中ChTLR7 mRNA的表达自接种后第12 h开始增加,第24 h时达峰值,随后迅速下降,约72 h后恢复至疫苗接种前水平。表明ChTLR7可能参与了IBDV感染早期的天然免疫反应过程。     

猪传染性胃肠炎病毒S基因A抗原位点序列的克隆与原核表达

将RT-PCR扩增的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因A抗原位点目的片段克隆、双酶切后连接于表达载体,经酶切、PCR和测序鉴定的阳性重组质粒转化BL21(DE3),用IPTG诱导,进行SDS-PAGE和Western-blotting分析,确定目的蛋白的原核表达情况和免疫特异性。结果显示,目的片段的大小为534bp,序列分析表明,该基因与其他TGEV相应基因具有很高的同源性;Western-blotting检测可见分子质量约43 ku的融合蛋白条带,表明,该蛋白具有良好的反应原性。     

猪传染性胃肠炎病毒重组M蛋白免疫血清在病原检测中的应用

以纯化的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)重组M蛋白免疫新西兰兔,制备免疫血清,用间接ELISA测得免疫血清效价达1∶14 000。通过间接ELISA进行病原检测,表明制备的免疫血清与全病毒具有较好的特异性。用免疫血清进行病原间接免疫荧光检测,TGEV感染的细胞培养物中多数细胞在其胞浆和细胞膜上出现黄绿色闪亮荧光,且荧光强度强,而未接种病毒的细胞培养物未见有黄绿色闪亮荧光,表明用所制备的抗TGEV重组M蛋白的免疫血清进行病原间接免疫荧光检测具有较高的特异性,为TGEV准确快速诊断与鉴别奠定了基础。