口蹄疫病毒3D基因的真核表达及其表达产物的功能分析

利用RT-PCR技术扩增口蹄疫病毒(FMDV)编码RNA依赖的RNA聚合酶的3D基因,经测序确认后将其克隆到真核表达质粒载体pcDNA3.1( )中,重组质粒pcDNA3.1( )-3D经HindⅢ、XbaⅠ双酶切后转染至BHK-21细胞,用纯化的目的蛋白进行Western-blotting鉴定,并预测该3D基因表达产物的三级结构。结果显示,获得分子质量约55 ku的单一3D基因表达产物,其三级结构较为保守。利用RNA细胞内复制体系和荧光定量RT-PCR技术,证明3D基因表达产物在细胞内可促进口蹄疫病毒基因组的复制。     

吉安县构建三重网络加强对党政“一把手”的监督管理

为促进社会经济协调发展，广东省政府办公厅近日印发了《广东省社会发展水平综合评价方案》和《广东省社会发展水平综合评价指标体系》，定期对全省和各地级以上市的社会发展水平进行定量评估，并检查社会发展计划执行情况。     

PRRSV和PCV2共感染对猪肺泡巨噬细胞CD80-CD86 mRNA转录的影响

用猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与猪圆环病毒2型(PCV2)共感染40日龄健康大白仔猪,利用实时荧光定量PCR技术对共感染仔猪肺泡巨噬细胞(PAM)共刺激分子CD80-CD86的mRNA转录水平进行了定量分析。结果表明,在感染后第3 d和第7 d CD80与CD86 mRNA转录显著下调(P<0.05),感染后第14 d CD86 mRNA转录水平仍低于未感染对照组。尽管CD80 mRNA转录水平在第14 d和第28 d高于对照组,CD86 mRNA转录水平在第28 d高于对照组,两者在第42 d均高于对照组,但无显著差异。证实,PRRSV和PCV2共感染可导致猪肺泡巨噬细胞的共刺激分子CD80-CD86基因转录在感染早期明显受到抑制,PAM的抗原呈递能力受到影响。     

沙门菌实时荧光定量PCR检测试剂盒的研制与应用

根据沙门菌保守的fimY基因序列设计合成了引物和TaqMan探针,建立了快速检测沙门茵的实时荧光定量方法,并对反应条件进行了优化,组装成快速检测试剂盒。通过对临床样品的检测,该试剂盒的检测灵敏度达4．5 CFU(25μL反应体系),比常规PCR高100倍,而且稳定性良好,至少可以冷冻保存9个月。结果表明,所建立的沙门菌实时荧光定量PCR检测试剂盒具有操作简便、快速、特异性强、灵敏度高、重复性好、稳定性强等优点,适于大量样品的检测。     

关于行政问责法制化的几点思考

我国行政责任定性不明晰、定量不合理,导致行政问责普遍存在重权力轻责任、重有过轻无为、重"风暴"轻制度的弊端,特别是一些地方和部门的行政权力实际上处于无过即无风险、"无为"胜"有为"的状态.研究如何推进行政问责的制度化、法治化,完善我国行政问责制度,必将有助于提高行政执行力,提高政府公信力,巩固政府的合法性基础.     

GA118-24B遗传分析仪性能验证

通过荧光定量实验选定一系列浓度不同的标准品,分别在国产和进口遗传分析仪上进行平行实验,结果表明二者之间无明显差异,国产遗传分析仪的主要技术指标能满足检案需求。     

益气补肾化瘀方治疗早期糖尿病肾病临床观察

目的 观察益气补肾化瘀方治疗早期糖尿病肾病的临床疗效。方法 将64例早期糖尿病肾病患者分为对照组和治疗组,每组32例。对照组服用缬沙坦,治疗组服用缬沙坦和益气补肾化瘀方,疗程均为12周。比较两组治疗前后中医证候积分、血糖、血压、尿白蛋白排泄率（urinary albumin excretion rate,UAER）、24h尿蛋白定量(24-hour urine protein, 24hUP)、尿白蛋白与尿肌酐比值（urine albumin to creatinine ratio,UACR）变化情况。结果 治疗组临床疗效优于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。与治疗前比较,治疗组治疗后中医证候积分显著下降(P＜0.05),治疗组治疗后中医证候积分降低值显著大于对照组(P＜0.05)。与治疗前比较,两组患者治疗后空腹血糖（fasting plasma glucose,FPG）、收缩压、UAER、24hUP、UACR均显著降低(P＜0.05）,治疗组治疗后FPG、UAER、24hUP、UACR降低值显著大于对照组(P＜0.05）。结论 益气补肾化瘀方可提高早期糖尿病肾病患者的临床疗效,减少尿蛋白。     

驼源性核酸多重快速荧光定量PCR检测方法的建立及检测试剂盒的研制

为准确鉴定骆驼肉乳制品,减少市场中用低价肉乳制品冒充高价肉乳制品的欺诈违法行为,保障食品安全,维护公平合法贸易,建立多重实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）快速高通量检测骆驼核酸的方法。利用多重实时荧光定量PCR法构建肉乳制品中骆驼成分检测方法,设计了哺乳动物18S rRNA基因与骆驼cytB基因的引物探针,对市面上常见肉乳制品进行检测。结果显示,本研究中针对肉乳制品的核酸提取方法不受食品添加剂影响,提取过程简便快捷高效,可于20 min之内完成提取;建立的多重实时荧光定量PCR法具有良好的特异性和灵敏度,在牛奶粉、羊奶粉、驼奶粉、骆驼肉制品、鲜猪肉和鲜骆驼肉6种样本中,成功特异地检测出骆驼成分,且在驼奶粉质量分数为30%、20%、10%、8%、5%、3%、1%和0.5%的条件下进行检测,全部成功检测出,准确度达100%。结果表明,建立的骆驼源性成分多重快速实时荧光定量PCR法可有效鉴别肉乳制品中的骆驼源性基因。     

猫传染性腹膜炎病毒实时荧光定量PCR方法的建立与应用

为建立一种高效准确检测猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)的实时荧光定量PCR方法,以FIPV N基因为靶基因设计特异性探针和引物,构建质粒标准品。通过优化反应条件,建立real-time PCR方法,并进行临床检测。经方法优化,所建立方法的标准曲线为y=-3.137x+42.243,R²值为0.999,扩增效率E为108.0%。该方法与猫瘟病毒(FPV)、猫疱疹病毒(FHV)和猫杯状病毒(FCV)无交叉反应,特异性良好;检测最低拷贝数为9.250 copies/μL,比常规PCR方法高出100倍;组内、组间变异系数均小于5.0%,重复性好。采用建立的方法和EvaGreen real-time PCR方法对39份临床样品进行检测,结果,检出阳性样品数分别为24和22,经Kappa检验,两者高度一致。上述结果表明,本研究成功建立了高效、敏感、特异的实时荧光定量PCR方法,可用于FIPV的临床病例检测。     

猴痘病毒荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种快速诊断猴痘病毒（MPXV）的检测方法,根据2022年公布的MPXV的靶基因片段F3L(462 bp,GenBank登录号ON563414)保守区域,设计了1对特异性的引物和1条探针,建立了猴痘病毒荧光定量PCR检测方法。结果显示,本方法仅能有效检测MPXV,与天花病毒、牛痘病毒、痘苗病毒及鼠痘病毒均无交叉反应;对重组质粒标准品的最低检测限为36.5 copies/μL;组内与组间的重复试验变异系数均小于2%;该方法与中国计量科学研究院使用的绝对定量数字PCR方法检测F3L假病毒颗粒的结果一致性达100%。由此表明,本研究中建立的检测方法特异性强、敏感性高、重复性和实用性好,可以用于猴痘病毒的快速鉴别诊断,为口岸进境动物和入境人员的筛查提供了有效的技术手段。