A real-time multiplex SNP melting assay to discriminate individuals

A method that quickly and inexpensively differentiates crime scene samples from multiple donors would expedite casework analysis by allowing the selection of probative items requiring comprehensive testing. This new method need not be perfectly definitive nor give a complete 13 locus short tandem repeat (STR) profile; it simply must be able to differentiate between most victim and suspect samples. We describe the development of multiplex, single nucleotide polymorphism (SNP), fluorescence resonance energy transfer-based real-time polymerase chain reaction (PCR) assays to fulfill this need. Dual probes, one fluorescently labeled and the other labeled with a quencher, are monitored during a melt analysis to reveal an increase in fluorescence, which allows the assessment of the two SNP alleles. Two alternate 6-plex assays (with and without gender determination) have been developed for the six-color RG6000 real-time instrument (Corbett Robotics, Inc.) and one seven SNP plus gender assay (performed as two 4-plex assays, one with gender the other without) have been developed for use in four/five color real-time instruments. This technique can discriminate between 95% and 99% of samples from different individuals. This assay is fast (approximately 2 h), much less expensive than STR analysis, and uses a real-time PCR instrument which is found in most forensic and molecular biology labs.     

大鼠急性心肌缺血后肌浆网RyR2 mRNA表达变化

目的 研究大鼠急性心肌缺血后心肌肌浆网兰尼碱受体蛋白2(ryanodine receptor 2,RyR2)mRNA表达的变化.方法 将SD大鼠分为正常对照组、心肌缺血组和缺血性猝死组.采用腹腔注射垂体后叶素的方法复制大鼠急性心肌缺血和猝死模型,对心肌进行半定量荧光RT-PCR检测,观察RyR2 mRNA表达水平的变化.结果 与正常对照组相比,不同时间和不同程度的急性心肌缺血后心肌肌浆网RyR2 mRNA表达均显著降低(P<0.05).结论 心肌缺血性损伤可诱导心肌钙调控蛋白RyR2 mRNA表达下调.     

鼠抗人转铁蛋白单链抗体基因的构建

目的为了得到可经载体连接表达、并只由抗体可变区构成的单链抗体基因而进行本实验.方法经扩增得到的鼠抗人转铁蛋白抗体轻、重链可变区基因经凝胶电泳分离、离心柱纯化及定量,同能柔性折叠的一段短连接肽基因一起进行扩增拼接反应,而后在含限切酶位点的引物指导下扩增引入限切酶SfiI和NotI的酶切位点识别序列,产物以电泳鉴定、纯化和定量,再分别用SfiI和NotI酶切消化,最后再柱纯化.结果得到了携带可与载体连接的粘性末端的鼠抗人转铁蛋白单链抗体基因.结论两个不同的基因通过两端含互补序列的第三个基因片断可只经过扩增而无需DNA连接酶的作用而连接起来.对于抗体基因可由此而产生新的轻重链基因的组合,有可能产生性能更优异的抗体.     

虚拟价值链的理论与应用

本文详述了虚拟价值链的思想 ,并尝试构建出虚拟价值链的一般理论模型 ,从而解决了企业在信息时代的竞争中缺少战略指导的缺陷。通过论述虚拟价值链和传统价值链的关系 ,本文指出了虚拟价值链模型的适用范围 ,并提出了企业应用这一模型进行竞争的基本原则和方法。     

证据保管链制度研究

证据保管链制度要求建立自侦查阶段收集证据至审判阶段将证据提交法庭的完整记录体系;除少数例外情形,所有接触证据的人员都必须出庭作证。这一制度对规范侦查、起诉人员收集、运输、保管证据等行为,协助法官和辩护方审查判断证据的真伪,都具有极为重要的意义。我国刑事诉讼法只要求对证据的收集进行记录,而不要求对证据的运输、保管、鉴定等也进行记录,更不要求接触证据的人员出庭作证;这对保障实物证据的证明力极为不利。我国在未来立法时有必要借鉴域外经验,建立系统的证据保管链制度。     

冷战期间缅甸的中立外交政策

独立后的缅甸一直奉行独立自主的中立外交政策,在与中美苏三大国的关系上表现的尤为突出。冷战期间,缅甸与三大国的外交关系有以下特点:其一,缅甸与三大国都基本上保持着正常的关系,没有产生大的矛盾和冲突;其二,不与任何大国结盟,从不倒向任何一方。其三,在与三大国的关系中,缅中关系显得更为密切,但两国仍属于正常的国家关系,并没有结成同盟。总的来说,缅甸的对外政策确实是中立和不结盟的。     

ABO基因分型及其在法医学中的应用

为建立一种ABO血型系统基因分型方法，采用PCR-RFLP技术，成功地将ABO系统区分为AA，AO，AB，OO，BB，BO六种基因型。对240名中国汉族无关个体血样的ABO（基因型频率调查结果表明，6种基因型的频率分布为0．0125～0．3834，符合Hardy－Weinbeng遗传平衡法则（P＞0．1），其DP值为0．8161。家系分析表明，亲代a、b、o基因传递遵守孟德尔遗传规律。对法医学中常见的血痕、混合斑、骨组织及毛发根部等生物样品进行检测，均能准确判定ABO基因型，并可在实际案件鉴定中应用。     

PCR法对HLA-DQ_α基因的分型及其在性犯罪鉴定中的应用

本文应用 PCR 法及 ASO 探针斑点杂交技术,对100例无关个体血液 DNA 及10例性犯罪案件混合斑中精子 DNA 进行了 HLA-DQα基因的扩增及其 DNA 分型。结果正常人0.1～0.3μgDNA 就能满足 DQα基因扩增的需要。在100例个体中可以观察到由4种等位基因组成的10种 DQα基因型。10例不同条件的混合斑中精子 DNA 经30～60次扩增后与 ASO 探针杂交均能准确地判定 DQα基因型。HLA-DQα是个体识别能力较强的遗传标志。本文为性犯罪中精子来源的个体识别提供了一个新方法,具有一定的实用价值。     

WTO框架下云南农业结构的调整和优化

在我国加入WTO和普通农产品过剩的前提下,调整和优化我省农业结构,必须提高产品质量和增加具有竞争力强的品种,必须将产业链进行必要的延伸,必须改变经营者的状态。