猪IL-18基因的原核表达及重组蛋白的纯化

以pcDNA3.1-pIL-18为模板,采用PCR技术扩增到了猪白细胞介素18(IL-18)的成熟蛋白基因,通过KpnⅠ SacⅠ双酶切及连接反应,构建了pET32c-pIL-18原核表达质粒。经过限制性内切酶分析、PCR鉴定及DNA序列测定证实,重组质粒中的基因片段连接正确。之后,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),于37℃、1.0 mmol/L IPTG条件下诱导表达。菌体裂解产物经SDS-PAGE分析,在分子质量约为33 ku处出现了预期的目的蛋白。用8 mol/L脲对表达产物变性,经Ni2 -NTA柱纯化,透析复性,得到了纯化的IL-18蛋白。Western-blot分析证实,纯化的重组IL-18蛋白具有反应活性。上述研究结果为重组IL-18的应用奠定了基础。     

phyA基因的克隆及其新型表达载体的构建

直接以黑曲霉菌株F2 4 6基因组为模板 ,对植酸酶基因phyA的成熟肽 (分子长度为1347bp)进行了PCR扩增 ,再将PCR产物克隆入 pMD 18 T质粒 ,经DNA测序鉴定正确后 ,亚克隆入表达载体 pET30a 和 pMG36e ,成功构建了phyA基因 2种新型表达载体。植酸酶 phyA基因2种新型表达载体的构建 ,为进一步获得大量、高活性植酸酶以及研究和开发新型微生态制剂打下了基础。     

补肾方含药血清处理的大鼠成骨细胞miRNA差异表达

目的 筛选补肾方含药血清干预的大鼠成骨细胞中差异表达的miRNA,为补肾方治疗骨质疏松症提供可供选择的目标miRNA,以探讨其通过调控靶基因表达发挥治疗效应的机制。方法 经细胞性状鉴定的原代大鼠成骨细胞用含药血清干预,采用miRNA芯片检测补肾方含药血清干预3 d与干预1 d的成骨细胞miRNA表达水平,并挑选差异表达2倍以上的miRNA进行定量PCR验证。结果 培养的原代细胞具有典型的成骨细胞性状特征。与对照血清相比,补肾方含药血清干预3 d的成骨细胞共有24个2倍以上表达差异的miRNA,其中上调的16个,下调的8个。差异表达2倍以上的miRNA定量PCR结果与芯片数据一致。结论 补肾方通过成骨细胞中差异表达的miRNA调控靶基因改善骨质疏松症。     

针刺对2型糖尿病大鼠脂肪组织INSR基因表达的影响

目的探讨针刺对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)机体脂肪组织胰岛素受体(insulinreceptor,INSR)基因表达的影响。方法给食源性肥胖大鼠腹腔注射小剂量链脲佐菌素复制T2DM模型,随机分为针刺组、优降糖组和模型组,设正常对照组。处理4周后,采用罗氏活力型血糖仪测空腹血糖(fast-ing blood sugar,FBS),采用放射免疫法检测空腹胰岛素(fastinginsulin,FINS),采用原位杂交检测脂肪细胞INSRmRNA表达,计算胰岛素敏感性指数(insulin sensitivity index,ISI)和稳态模型评估胰岛素抵抗(homeostasis model assessment of insulin resistance,Homa-IR)指数。结果与正常组比较,模型组FBS、FINS、ISI、Homa-IR水平显著上升(P<0.01),INSR基因水平表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,治疗后优降糖组和针刺组FBS、FINS、ISI、Homa-IR显著下降(P<0.05,或P<0.01),INSR基因表达显著升高(P<0.01)。...