鸡堆形艾美球虫3-1E基因真核表达质粒的构建及其抗球虫免疫保护作用

应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从堆形艾美球虫SH株子孢子中扩增3-1E基因片段,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)-3-1E.质粒纯化后体外转染293T细胞,通过间接免疫荧光技术和免疫组织化学技术检测3-1E蛋白在转染细胞中的表达情况.将构建的重组质粒以及空载体质粒分别于14、21日龄分2次经腿部肌肉注射免疫SPF雏鸡,28日龄除非免疫非感染对照组外各组攻击性感染5×104个堆形艾美球虫孢子化卵囊,观察真核表达质粒对球虫感染鸡的免疫保护作用并探讨其免疫保护机理.结果显示,与载体对照组相比,质粒pcDNA3.1(+)-3-1E 2次免疫后可显著提高脾CD8 T淋巴细胞亚型数量,并具有一定的抗球虫免疫保护作用,可显著减少每克粪便的卵囊排出量,降低十二指肠病变记分,减少增重下降等.     

表达狂犬病病毒CVS-11株糖蛋白的重组伪狂犬病病毒在犬体内的免疫效果

为研制一种新型有效的狂犬病重组活载体疫苗,将EGFP-rgp的表达框克隆入p8-AA载体的Sph Ⅰ/Nde Ⅰ酶切位点处,将酶切鉴定为正向连接的阳性重组子命名为p8AA-EGFP-rgp.在质脂体介导下将该质粒与Bartha-K61共转染PK-15细胞,获得能够表达狂犬病病毒(RV)CVS-11株糖蛋白的重组伪狂犬病病毒rPRV/EGFP-rgp,经RT-PCR和Western-blot鉴定后对犬进行肌肉注射免疫,并测定相应试验指标,研究重组病毒对犬的免疫诱导情况.结果显示,重组病毒可以有效地刺激机体产生体液免疫和细胞免疫;产生的针对RV的中和抗体水平[(0.95±0.21)U/mL]在14周时还保持相对国际最低保护标准(0.5U/mL)较高的水平;且产生的针对RV和PRV的中和抗体水平均达到了相应灭活疫苗和减毒活疫苗的水平,抗体效价均维持在14周以上.     

粪肠球菌抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

利用超声波裂解法制备粪肠球菌的裂解物作为抗原包被酶标反应板,通过棋盘滴定方法筛选最佳反应条件,成功地建立了检测致羔羊脑炎粪肠球菌抗体的间接ELISA.在此间接ELISA中,抗原最佳包被浓度为37.57μg/mL,被检血清的最佳稀释度为1100.建立的间接ELISA的灵敏度是微量凝集反应的25～100倍.交叉试验、阻断试验、重复性试验表明,该方法具有重复性好、特异性强、操作简便快速等特点.确立的检测ELISA效价的回归方程lg[1/ET]=1.275 2.730 D405mm,可用于抗体定量测定.利用此方法检测了来自未免疫绵羊场的50份成年绵羊的血清和50份羔羊的血清;结果,2份成年绵羊的血清为阳性,其他样品均为阴性.     

重组鸡痘病毒首免与灭活疫苗加强免疫对高致病性禽流感免疫效果的影响

用表达H5亚型禽流感病毒(AIV)HA与NA基因的重组鸡痘病毒(rFPV)rFPV-12LSH5NA对10日龄带有H5亚型AIV母源抗体的商品鸡进行了首次免疫,17日龄时再用H5亚型AIV全病毒灭活疫苗加强免疫.免疫鸡分为2个批次,分别在24和31日龄用H5亚型AIV进行致死性攻击.在24日龄攻毒组中,rFPV首免与全病毒灭活疫苗加强免疫组的死亡比例(0/17)显著低于17日龄全病毒灭活疫苗单独免疫组(16/17).在31日龄攻毒组中,rFPV首免与全病毒灭活疫苗加强免疫组的死亡比例(0/17)显著低于10日龄rFPV单独免疫组(6/17).结果显示,在鸡群普遍存在针对H5亚型AIV母源抗体的情况下,rFPV首免与全病毒灭活疫苗配合使用能使鸡体快速建立坚强的免疫保护反应,是一种非常有效的免疫策略.     

洛南县疾病预防控制中心 抓重点 攻难点 筑牢群众健康防线

洛南县疚控中心,在学习实践科学发展观活动中,注重疾控实效,两次获全省先进县殊荣,成为同行业的典范.     

VEGF在家兔缺血心肌中的表达及其死后稳定性研究

目的观察心肌中VEGF在死后一定时间的稳定性及表达的变化规律，评价其对死后诊断机体早期心肌缺血的作用。方法用冠状动脉结扎法建立家兔急性心肌缺血模型，应用SP法染色、图像分析和统计学处理系统，检测缺血心肌细胞内VEGF阳性表达面积和强度，并对VEGF在死后不同时间的稳定性进行比较。结果VEGF在缺血心肌组织中，见灶性或成片心肌细胞强阳性表达，部分细胞呈阴性或弱阳性表达，血管内皮及平滑肌细胞表达弱阳性，间质表达阴性；在4℃放置，随时间延长，缺血心肌组织VEGF阳性表达有减弱趋势，至10d时缺血心肌组织仍可见VEGF在少许心肌细胞胞浆内呈弱阳性表达。在4℃放置10d以内，缺血心肌和正常心肌标本之间VEGF阳性表达具有极显著性差异。结论VEGF能耐受一定程度自溶及腐败的影响，其免疫组化检测对于判断死后4℃放置10d以内的尸体是否出现过心肌缺血具有一定意义。     

护肝片对纤维化肝组织TGF-β1表达的抑制作用

目的:探讨护肝片对中、晚期纤维化肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白及mRNA表达的影响.方法:采用125 g/L CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型,自模型复制之日起,大鼠分组灌胃给药(护肝片921 mg/kg)或溶媒,每日1次,直至8,13周末,分别处死动物,取左叶肝组织石蜡包埋,制作组织芯片.免疫组化S-P法检测大鼠肝组织TGF-β1蛋白的表达;原位杂交检测TGF-β1 mRNA的表达.用MetaMorph图像分析系统对TGF-β1蛋白及mRNA的表达量进行定量分析.结果:①模型复制8周和13周,模型组的肝损伤及其纤维化分级均明显高于正常组(P<0.01),护肝片组的肝损伤及其纤维化分级均轻于模型组.②模型复制8周和13周,模型组TGF-β1及mRNA的表达均较正常组显著增多(P<0.01);且其蛋白和mRNA的表达相互间呈显著正相关(P<0.01).③护肝片显著抑制8,13周纤维化肝组织TGF-β1蛋白及mRNA的表达(P<0.01).结论:护肝片可减轻肝组织的损伤及其纤维化程度,它可能在蛋白及mRNA双重水平上抑制TGF-β1的表达,从而发挥抗肝纤维化作用.     

实验性大鼠急性心肌缺血的组织化学和扫描电镜观察

本文报告40只大鼠结扎左冠状动脉所致实验性心肌梗死早期（缺血1～8h）的病理形态学变化。结果发现苏木素-碱性复红-苦味酸（HBFP）和吖啶橙荧光染色诊断早期心肌缺血较敏感，氯化-2，3，5-三苯基四氮唑（TTc）大体染色法显示缺血境界鲜明可靠。此三种方法不受室温（15～20℃）死后自溶12～48h的影响。酸性复红染色（AF）对早期缺血组织较敏感，但受死后自溶影响，妨碍认定缺血区。扫描电镜（SEM）观察心肌缺血改变基本与透射电镜（TEM）相同，与早期自溶改变难以区别。     

关于成立天津市重点疾病预防控制和免疫规划工作领导小组的通知

<正> 各区、县人民政府,各委、局,各直属单位:为了进一步加强我市疾病预防控制和免疫规划工作,市人民政府决定成立天津市重点疾病预防控制和免疫规划工作领导小组(以下简称领导小组)。现将领导小组成员名单通知     

威灵仙总皂苷对角叉菜胶致炎大鼠的抗炎作用

目的:观察威灵仙总皂苷对角叉菜胶致炎大鼠足跖肿胀的影响,探讨其抗炎作用机制.方法:以角叉菜胶致大鼠足跖肿胀为实验模型,测定大鼠的足肿胀度,测定并比较各组大鼠血清一氧化氮(nitric oxide, NO)、溶菌酶和丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量及一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)、抗超氧阴离子自由基、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)的活力.结果:威灵仙总皂苷100 mg/kg能够显著抑制大鼠足肿胀度,威灵仙总皂苷100, 50 mg/kg能够显著降低致炎大鼠血清NO、溶菌酶和MDA含量,升高抗超氧阴离子自由基、SOD活力,并能抑制NOS的活力.结论:威灵仙总皂苷的抗炎作用与其调节血清炎性递质的平衡相关.