旋毛虫TsP53重组蛋白对小鼠的免疫保护性

将旋毛虫TsP53重组蛋白以20μg/只的剂量免疫小鼠3次后攻击感染旋毛虫肌幼虫200条/只。检查小鼠肠道旋毛虫7日龄成虫数、雌虫体外产新生幼虫数和感染35d后的肌幼虫数,并计算减虫率,同时用间接ELISA检测血清中抗TsP53重组蛋白的抗体应答。结果显示,TsP53重组蛋白免疫小鼠旋毛虫7日龄成虫、雌虫产新生幼虫的减虫率分别为14.34%和16.93%,与感染对照组和佐剂对照组相比差异不显著(P0.05);感染35d后肌幼虫减虫率为38.68%,与感染对照组和佐剂对照组相比差异显著(P0.05)。TsP53重组蛋白免疫小鼠在首次免疫后第7天出现抗体应答,可检测到抗TsP53重组蛋白的抗体,第3次免疫后第7天达到峰值,攻击感染后略有下降,但直到试验结束时仍然维持在较高水平,TsP53重组蛋白可诱导小鼠产生部分抗旋毛虫的免疫保护性。     

猪圆环病毒2型ORF2截短基因片段真核表达载体的构建及其DNA疫苗的免疫效果

为研究猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2截短基因片段核酸疫苗的免疫效果,以PCV-2 GXWZ-1株为模板,用PCR方法扩增出ORF2基因及其截短基因共8个片段[A(ORF2)、B(51～100 aa)、C(101～150 aa)、D(181～235 aa)、E(151～200 aa)、F(51～150 aa)、G(101～235 aa)、H(51～235 aa)],将其插入pcD-NA3.0栽体中,成功构建了pcDNA-A、pcDNA-B、pcDNA-C、pcDNA-D、pcDNA-E、pcDNA-F、pcDNA-G、pcDNA-H.将纯化后的真核表达质粒转染PK-15细胞后,用间接免疫荧光试验检测各个质粒在细胞中的瞬时表达情况.分别用单独免疫和组合免疫的方法免疫小鼠,每只0.15 mg,用ELISA试剂盒检测小鼠血清中的抗体效价,并分析这两种方法的免疫效果.结果显示,6个片段较短的重组质粒(pcDNA-B、pcDNA-C、pcDNA-D、pcDNA-E、pcDNA-F、pcDNA-G)转染的细胞中均有明显且较亮的荧光出现,而2个片段较长的重组质粒(pcDNA-A、pcDNA-H)及空载体pcDNA3.0转染的细胞中没有荧光出现.在单独免疫组中,这8个片段的真核表达质粒都能刺激机体产生特异性抗体,其中片段较短的pcDNA-C、pcDNA-D、pcDNA-E的免疫效果比较理想;在组合免疫中,除pcDNA-C-F外,各个真核表达质粒都能产生较高水平且稳定的抗体,其中pcDNA-D-H、pcDNA-B-F的免疫效果最好.表明组合免疫要比单独免疫的效果好.     

小反刍兽疫病毒F基因真核载体的构建与表达

根据GenBank中小反刍兽疫病毒(Nigeria 75/I株)F基因序列设计了引物,应用RT-PCR方法获得了目的基因,纯化回收后将其连接到克隆载体pMD18-T上.将鉴定与序列测定后的目的基因再克隆到真核表达载体pEGFP-N1上,经过鉴定,成功构建了含有小反刍兽疫病毒F基因的真核细胞表达栽体pEGFP-N1-F.利用脂质体介导阳性pEGFP-N1-F质粒转染了BHK-21细胞.Western-blotting证实,表达的pEGFP-N1-F融合蛋白(90 ku)具有免疫活性.     

两种旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂对小鼠免疫保护效果的评估

为评估旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂对BALB/c小鼠的免疫保护作用,选用2种重组表达的Serpin型和Kazal型旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂（TsAdSPI和TsKaSPI）,联合弗氏佐剂通过腹腔注射的方式单独免疫小鼠,用间接ELISA法检测免疫后小鼠特异性血清抗体Ig G以及Ig G亚型（IgG1和Ig G2a）的水平,用CCK-8法测定重组蛋白刺激后脾淋巴细胞的增殖情况,用ELISA法检测脾淋巴细胞培养液上清中细胞因子IFN-γ、IL-10、IL-12和IL-4的水平;使用旋毛虫肌幼虫攻击感染免疫后的小鼠,计算并分析小鼠肠道成虫减虫率及肠道病理变化,并评估TsAdSPI和TsKaSPI与ISA206佐剂联合免疫小鼠后对小鼠肠道成虫减虫率的影响。结果表明,与PBS组相比,2种重组蛋白所诱导的Ig G和Ig G亚型抗体水平均明显升高,IL-12、IFN-γ、IL-4和IL-10表达水平也均显著升高,且重组蛋白可诱导免疫小鼠脾淋巴细胞的体外增殖;攻虫结果表明,2种重组蛋白免疫后小鼠肠道旋毛虫成虫数量较PBS组显著减少且肠道病理变化减轻;2种重组蛋白联合免疫组的成虫减虫率高于单独免疫组。上述结果...     

ASFV毒力蛋白MGF360-9L降解宿主蛋白MATR3促进病毒复制的研究

非洲猪瘟（African swine fever,ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）感染所引起的一种高度致死的传染性疾病。ASFV多基因家族编码的MGF360-9L已被证实是ASFV重要的毒力蛋白,是ASFV逃逸宿主天然免疫应答的关键之一。本实验室的前期研究基础表明,宿主细胞核基质蛋白3(Matrin 3,MATR3)可能是MGF360-9L的相互作用蛋白之一,但这种相互作用未经验证。此外,MGF360-9L和MATR3之间是否存在相互调控,对于病毒复制或宿主免疫有何意义尚不可知。因此,本研究首先通过免疫共沉淀（Co-immunprecipitation,Co-IP）验证MGF360-9L与MATR3的相互作用;通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹（Western-blot）分析ASFV野生型病毒株（ASFV-WT）、ASFV MGF360-9L缺失毒株（ASFV-ΔMGF360-9L）感染或MGF360-9L过表达对MATR3表达的影响;通过RT-qPCR、Western-blot以及分析ASFV荧光重组毒株复制...     

鹅细小病毒在雏鹅体内分布的免疫组织化学检测

采用间接免疫酶组织化学染色法对14日龄雏鹅人工感染鹅细小病毒后不同时间段病毒抗原在体内的定位及分布情况进行了检测,同时应用图像分析软件对免疫组织化学图像中的抗原强度进行了定量分析。结果显示,感染后第1天到第21天,在心、肺、脾、肝、法氏囊、胸腺、腺胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、食管12种组织器官中检测到了病毒抗原。其中感染后第5天的感染组织最广泛,抗原染色强度最高,在检测的组织中以空肠的检出率最高。病毒抗原广泛分布于肠道的上皮细胞、腺上皮细胞,肺泡壁细胞和肾小管的上皮细胞内。始终未能从大脑、胰腺和骨骼肌中检测到鹅细小病毒。可见该病毒感染雏鹅后存在于患病鹅的大部分组织器官内,进一步证实该病毒是一种泛嗜性病毒。     

鸡胚胎腺垂体卵泡刺激素细胞的发育及其变化

应用免疫组织化学方法,对发育的第3.5～20.5天鸡胚腺垂体卵泡刺激素(FSH)细胞的发生及其在发育过程中的变化规律进行了研究。结果,鸡胚发育的中期(第10.5天),可观察到少量明显的FSH细胞分布于腺垂体后叶,随着胚胎的发育,FSH细胞数量显著增加(P<0.05),发育的第16.5天FSH细胞数量增加到了整个孵化期的最大值,分布于垂体后叶的腹侧,前叶仅有少量零散的FSH细胞;在发育的第18.5天至出生期FSH细胞数量显著减少。早期FSH细胞体积小、细胞浆少、细胞核大,单个或团状分布,随着胚龄的增加,细胞体积增大、细胞浆增多、细胞浆浓染。结果表明,鸡胚胎腺垂体FSH细胞发生于胚胎发育的中期,细胞的增殖和分化过程发生在胚胎发育的中后期;FSH细胞分布于垂体后叶腹侧。     

心肌缺血猝死心肌中高迁移率族蛋白B-1的表达研究

目的探讨高迁移率族蛋白B-1(High Mobility Group Box protein 1,HMGB1)在心肌缺血猝死后诊断中的法医学价值。方法收集不同案例心肌蜡块分为疑似早期心肌缺血猝死组(早期梗死组)20例、心肌梗死猝死组(心肌梗死组)15例、冠心病非心源性猝死组(对照组1)10例和正常心肌组(对照组2)10例,应用免疫组织化学二步法染色,观察心肌胞核和胞浆中HMGB1表达,用ImagePro Plus 6.0软件计算HMGB1表达的平均光密度,用SPSS 13.0对表达进行数据统计分析。结果 HMGB1在四组心肌细胞胞核中表达均呈阳性;早期梗死组和心肌梗死组胞浆均呈阳性表达,对照组1和对照组2胞浆呈阴性。各组平均光密度分别为0.3031±0.0557、0.3195±0.0523、0.0252±0.0030、0.0207±0.0029,早期梗死组和心肌梗死组的阳性反应与两个对照组相比存在显著差异(P﹤0.01)。结论 HMGB1可作为早期心肌缺血猝死的一个辅助诊断指标。     

婴儿湿疹的防治

婴儿湿疹俗称"奶癣",通常在出生后40天左右发病,2岁左右可痊愈,但有过敏家族史的往往会延续到青少年。婴儿湿疹的病因较为复杂,与遗传因素免疫因素及环境因素等有关。婴儿湿疹的变应原常常以食物为主,如牛奶、蛋类、大豆、坚果、麦麸、鱼虾贝类等,与牛奶关系最为密切。     

让依法文明养犬深入人心

养犬管理看似小事,却涉及千家万户,是一项面广量大的城市管理工作。2011年5月15日,《上海市养犬管理条例》正式施行。这部在制定过程中就引发各方热议和各种观点激烈碰撞的地方性法规,一年多来的贯彻实施效果如何,也牵动着全社会的关注。在《条例》实施一周年之际,市人大常委会展开了一系列监督调研,认真"审视"这部法规的执行效果。