新城疫病毒融合蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

用新城疫病毒(NDV)F48E8株作为包被抗原,建立了检测由鸡痘病毒载体介导表达的NDV融合蛋白(F)抗体的间接ELISA方法.通过对20份阳性血清的P/N值与ELISA抗体效价(ET)的自然对数值(lnET)的线性回归分析,获得了回归方程lnET =0.201×P/N+4.632.应用该ELISA方法对表达NDV F基因的重组鸡痘病毒免疫鸡群进行了血清抗体检测,结果表明,血清的ELISA抗体效价与相应血清中和试验的抗体效价高度相关.攻毒保护试验的结果显示,ELISA抗体效价与机体的保护力表现一定程度的相关性.     

肺表面活性蛋白A检测辅助鉴定窒息死2例

1案例 1．1案情 案例1：某女，31岁，其尸体在自家井中被发现，高度腐败。案例2：某女，29岁，在出租屋内死亡，高度腐败。2例首次尸检均未检出致命性损伤。     

新城疫病毒F蛋白免疫活性片段的原核表达

利用已构建的新城疫病毒F基因重组质粒,通过氨基酸序列分析和InsightⅡ基因工作站的MODELER程序和同源模建技术,预测了试验株F蛋白的表面抗原分布位置.设计引物扩增了2段含有多个抗原位点的多肽片段,通过双酶切定向克隆到原核表达载体pET32a,获得了重组质粒pET32a-F1和pET32a-F2以及2个片段串联起来后克隆的重组质粒pET32a-F3.重组质粒经诱导表达并取产物进行分析,结果显示,F1、F2、F3片段均获得了融合表达.Western-blotting证实,表达产物F1、F2和F3与NDV阳性血清均具有免疫反应性.用表达的重组蛋白加免疫佐剂经皮下接种免疫鸡,免疫2次后产生较高的抗体水平,用100 LD50的超强毒株GD-05-2攻击,重组蛋白免疫组鸡可达到约70%的保护率,并可显著抑制排毒.     

鸭瘟病毒TK基因的克隆及其分子特性分析

通过测定动物疫病与人类健康四川省重点实验室构建的鸭瘟病毒(duck plaque virus,DPV)DNA基因文库中重组质粒的DNA序列,得到了该病毒胸苷激酶(TK)基因的ORF.采用PCR扩增出了DPV TK基因并将其克隆到pMD18-T载体上,之后对重组质粒进行了PCR和双酶切(BamH Ⅰ Hind Ⅲ)鉴定,并利用生物信息学软件Genscan、ProtScale、SignalP2.0、Scansite、TMpred、Prosite、DNAStar以及在线Predictprotein等分析了TK基因的分子特性.结果显示,DPV TK具有疱疹病毒的典型特征,含有ATP结合结构域和核苷酸结合结构域2个功能结构域,且具有与功能相关的磷酸化位点和氨酰化位点;编码的多肽链中亲水区域大于疏水区域,是一种膜外蛋白.DPV TK基因与禽类疱疹病毒(α-疱疹病毒)的进化关系最近.     

用抗体致敏SPA菌体浓缩新城疫病毒方法的建立

将金黄色葡萄球菌与灭活的猪抗新城疫病毒(NDV)抗血清混合,37℃感作致敏30min,将致敏的金黄色葡萄球菌加入NDV污染材料洗脱液中,37℃水浴30min,离心洗涤并悬浮菌体于PBS中,取适量用于电镜观察或RTPCR。结果显示,电镜下观察可见NDV吸附到金黄色葡萄球菌表面;经RTPCR对吸附NDV的菌体进行扩增后可见到特异性扩增带。通过条件优化,建立了NDV浓缩方法。用HA效价为29的NDVF48E9毒株尿囊液1∶800、1∶1600和1∶3200稀释液分别喷洒树叶及谷物,采用上述方法浓缩病毒,并经RTPCR检测。结果表明,致敏的金黄色葡萄球菌能够浓缩病毒,提高RTPCR检测的敏感性。     

养肝益水颗粒对高血压早期肾损害尿微量蛋白的影响

目的:观察养肝益水颗粒对高血压早期肾损害患者尿清蛋白排泄率(urinary albumin ex-cretion ratio,UAER)、尿微量清蛋白(microalbuminuria,MA)、β2微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)、α1微球蛋白(α1-microglobulin,α1-MG)、转铁蛋白(transferrin,TRF),免疫球蛋白G(immu-noglobulin G,IgGu)的影响.方法:选择80例符合中医辨证的高血压早期肾损害患者,随机分为治疗组和对照组.两组均给予常规降压治疗.治疗组同时加服养肝益水颗粒.两组疗程均为4周.分别于治疗前和治疗4周后进行UAER、MA、α1-MG、β2-MG、TRF、IgGu测定.结果:治疗后两组UAER、MA、α1-MG、β2MG、TRF、IgGu水平均显著下降,且治疗组与对照纽比较,上述指标的差异具有显著性(P＜0.05,P＜0.01).结论:养肝益水颗粒具有减少高血压早期肾损害尿微量蛋白排出的作用.     

基于布鲁氏菌Dps蛋白间接ELISA检测方法的建立与初步应用

为建立一种布鲁氏菌病早期快速诊断的血清学方法,进一步加强对布鲁氏菌病的防控.对布鲁氏菌Dps蛋白进行生物信息学分析、原核表达,将纯化后的重组蛋白作为包被抗原,建立了布鲁氏菌病血清学间接ELISA检测方法并进行初步应用.结果显示,当重组蛋白Dps包被量为0.25 μg,5％脱脂奶粉溶液封闭1.5 h,用稀释度为1∶1 0...     

金黄色葡萄球菌黏附素FnBPB-ClFA共表达质粒的构建与原核表达

采用PCR方法对编码金黄色葡萄球菌纤黏蛋白B的D区和纤黏蛋白原凝集素A的A区基因片段进行了特异性扩增,并通过重叠延伸PCR扩增了FnBPB-ClFA串联基因,构建了克隆质粒pMD19-FnB-PB-ClFA。将该基因片段定向插入到原核表达载体pET-32a(+)中,构建了表达质粒pET-FnBPB-ClFA,并将其转入宿主菌BL21(DE3)。SDS-PAGE分析表明,在1mmol/L IPTG诱导下,在51ku处出现了与目的蛋白一致的外源蛋白带。Western-blot分析表明,所表达的蛋白与目的蛋白一致。上述结果表明,该融合基因在原核细胞中成功表达。     

鹿流行性出血热病毒核心样颗粒的制备与鉴定

为制备鹿流行性出血热病毒(EHDV)的核心样颗粒(CLPs),本研究将鹿流行性出血热病毒(EHDV)L3与S7基因片段插入至昆虫杆状病毒穿梭载体pFastBac-Dual中,构建重组质粒pFastBac-Dual-vp3-vp7,并通过转座获得重组杆状病毒质粒Bacmid-vp3-vp7,随后转染Sf9细胞获得重组杆状...     

朊毒体蛋白的构象及其特性的研究进展

概述了朊毒体(包括构象不同的细胞型朊毒体和痒病型朊毒体)蛋白的构象特征、朊毒体及其突变体的特性,阐明了PrPsc是由PrPc通过构象转变而成的,不同物种PrP的三维结构有相似的球形结构域(125~228位)和N-末端无规卷曲尾,其球形结构域均由3个螺旋(144~154、173~194和200~228位)以及1对反平行的β-折叠(128~131和161~164)组成,但其结构和表面电荷分布存在一些区别。