针灸的基因表达调控效应研究进展

生命科学是21世纪的前沿学科,而基因组学与分子生物学又是生命科学的前沿.在此形式下,针灸学在现代研究的过程中充分利用现代科学技术手段,大胆借鉴生命学科的新思维、新方法、新技术,在针刺镇痛、抗炎、抗损伤、抗衰老等领域已取得初步的成就,其中针灸与镇痛、神经内分泌免疫复杂网络系统相关性研究成果已被医学界所认可.现将近十年的研究进展综述如下.     

新城疫病毒F48E9株病毒F基因表达盒的火鸡疱疹病毒转移质粒载体构建

将新城疫病毒(NDV)F48E9株融合蛋白(F)基因1700 bp克隆到真核表达载体pcDNA3中,构建成表达F基因的载体pc3F.然后将包含F基因及其上游的细胞巨化病毒启动子和增强子的3800 bp DNA片段再克隆入包含火鸡疱疹病毒(HVT)非必须片段载体pTK2B中,构建成功含有F基因表达盒的HVT转移质粒载体pTK3F.经限制性内切酶酶切分析,F基因表达盒的插入方向与pTK2B中TK基因转录方向一致.该研究为进一步在细胞中转染并获得表达F基因的HVT重组病毒奠定了基础.     

微量元素铜对软骨细胞胰岛素样生长因子mRNA基因表达的影响

分离培养仔猪关节软骨细胞,从中提取总RNA,采用RTPCR法扩增出关节软骨细胞中胰岛素样生长因子Ⅰ(IGFⅠ)的cDNA,与pMD18T载体相连,转化JM109大肠埃希氏菌,提取质粒,经鉴定,所扩增的片段为目的片段。在此基础上培养仔猪关节软骨细胞,并在培养液中添加不同水平的铜,分别在第0、12、24、48h收集软骨细胞,提取总RNA,采用RTPCR法扩增出IGFⅠ的cDNA,以βactin为内参,用凝胶分析系统对扩增出的cDNA进行扫描分析,计算IGFⅠmRNA基因表达的相对水平。结果,在细胞培养液中添加不同水平的铜能促进软骨细胞中IGFⅠmRNA基因表达,其中以铜浓度31.2μmol/L的效果最好。表明铜对软骨细胞的增殖作用是通过促进IGFⅠmRNA的表达来实现的。     

猪细小病毒SC-1株VP2基因的定点突变及其对该基因表达的影响

根据GenBank中的猪细小病毒(PPV)VP2基因序列设计并合成了2对突变引物,对PPV SC-1株VP2基因进行了定点突变.利用重叠延伸PCR技术分别将VP2蛋白中第402位(A)和214位(B)的半胱氨酸突变为精氨酸,并定向克隆入真核表达载体pPI-2.EGFP中,构建含报告基因EGFP的重组质粒pPI-2.EGFP.VP2(A)、pPI-2.EGFP.VP2(B);利用脂质体介导法将上述重组质粒转染COS-7细胞,从而研究该突变对VP2基因表达的影响.结果显示,成功构建了合突变体及EGFP的真核表达载体;在倒置荧光显微镜下,突变后的质粒转染呈现不同的荧光信号,A样品的荧光呈颗粒状分布于细胞中,而B样品与阳性对照相似,荧光信号均匀分布于细胞中.提示,突变的引入是导致表达差异的主要原因.     

卵巢老化相关基因筛选及针刺"肾俞"的干预作用

目的:筛选卵巢老化及针刺“肾俞”干预的相关基因。方法:建立自然的更年期大鼠模型,实验动物包括青年组、更年组、针刺组,采用mRNA差异显示PCR技术,筛选卵巢中差异表达的基因,其中部分进行克隆、测序,并与NCB I相关数据库进行同源性比较。结果:获得16条差异表达明显的cDNA片段,其中已测序的6条均为未知功能基因。结论:卵巢老化及针刺“肾俞”的干预效应可能是多基因参与作用的结果,对分离到的cDNA进一步研究有助于揭示其分子机制。     

针刺对2型糖尿病大鼠脂肪组织INSR基因表达的影响

目的探讨针刺对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)机体脂肪组织胰岛素受体(insulinreceptor,INSR)基因表达的影响。方法给食源性肥胖大鼠腹腔注射小剂量链脲佐菌素复制T2DM模型,随机分为针刺组、优降糖组和模型组,设正常对照组。处理4周后,采用罗氏活力型血糖仪测空腹血糖(fast-ing blood sugar,FBS),采用放射免疫法检测空腹胰岛素(fastinginsulin,FINS),采用原位杂交检测脂肪细胞INSRmRNA表达,计算胰岛素敏感性指数(insulin sensitivity index,ISI)和稳态模型评估胰岛素抵抗(homeostasis model assessment of insulin resistance,Homa-IR)指数。结果与正常组比较,模型组FBS、FINS、ISI、Homa-IR水平显著上升(P<0.01),INSR基因水平表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,治疗后优降糖组和针刺组FBS、FINS、ISI、Homa-IR显著下降(P<0.05,或P<0.01),INSR基因表达显著升高(P<0.01)。...