奶牛乳腺特异性表达人溶菌酶基因载体的构建与表达

为探讨应用转基因动物技术降低奶牛乳腺炎发病的可行性,参照人溶菌酶(human lysozyme,hLZ)基因序列(NM_000239.2)设计引物,采用RT-PCR方法从人胎盘组织中成功扩增克隆了406bp的hLZ基因成熟肽片段。应用娟姗牛酪蛋白乳腺特异表达调控元件,经过多步酶切、连接、转化、筛选、鉴定,构建成奶牛乳腺表达hLZ的载体pBCN5.2-hLZ-1.1pA-EGFP-neo(13.6kb)和pBCN-3.8-hLZ-1.1pA-EGFP-neo(12.2kb)。将构建的2个载体瞬时转染Bcap细胞,24h后可观察到EGFP的表达;通过实时定量PCR检测比较2个载体hLZ的表达丰度,结果,相对表达量分别为0.89±0.04和0.62±0.05。将线性化的pB-CN5.2-hLZ-1.1pA-EGFP-neo载体转染Bcap细胞,筛选后获得阳性细胞克隆,纯化阳性细胞总蛋白进行SDS-PAGE分析,与空白对照相比,检测到14ku的新蛋白条带。Western-blot分析中亦出现14ku的特异性条带。证实构建的载体能够正常表达hLZ基因,这为进一步研究获得自然抵抗乳腺炎的转基因奶牛奠定了工作基础。     

溶菌酶对围产期奶牛血清中两种补体及三种细胞因子质量浓度的影响

为了探讨溶菌酶对围产期(产前第21天到产后第21天,表示为-21st~21st d,下同)奶牛免疫抑制的缓解作用及其相关机制,选择18头围产期奶牛,分为3组,每组6头,Ⅰ组:每头奶牛每日饲喂基础日粮+2g溶菌酶,Ⅱ组:每头奶牛每日饲喂基础日粮+4g溶菌酶,Ⅲ组作为对照组,只饲喂基础日粮,试验期为45d。应用ELISA双抗体夹心法检测试验牛血清中C3、C4及IFN-γ、TNF-α、IL-6的质量浓度。结果显示,Ⅰ、Ⅱ组奶牛在-10th~7th d阶段,血清中C3、C4的质量浓度明显高于对照组(P0.05)。Ⅱ组血清中IFN-γ、TNF-α和IL-6的质量浓度均低于对照组,即IL-6的质量浓度从-14th到21st d与对照组存在极显著差异(P0.01),TNF-α的质量浓度从0到21st d与对照组差异均极显著(P0.01),IFN-γ的质量浓度虽然与对照组差异不显著(P0.05),但其含量也明显低于对照组;而Ⅰ组IFN-γ、TNF-α和IL-6的质量浓度与对照组均差异不显著(P0.05)。结果表明,溶菌酶对围产期奶牛的免疫抑制有缓解作用,且Ⅱ组的缓解作用明显优于Ⅰ组,这可能与溶菌酶能增加血清中C3、C4的质量浓度和降低IFN-γ、TNF-α和IL-6的质量浓度有关。     

好奶源打造中国好鲜奶

贵州好一多新的牧场建设,将利用自身全群引进的全谱系新西兰优质荷斯坦奶牛进行繁种,采用美国3A标准,建全群智能化管理现代化牧场,再次做好奶源建设。     

葡萄球菌 链球菌与奶牛乳房炎的关系及其对抗菌素敏感性的研究

经试验确认在广泛使用青霉素治疗后,奶牛乳房炎的主要病原菌为凝固酶阳性葡萄球菌;乳汁中病原菌的存在,与奶牛乳房炎的发生有一定关系,但细菌的检出不能就作为奶牛健康与否的唯一标志,奶牛乳房炎的发生与否,除与病原菌存在有关外,动物机体抵抗力以及外界环境因素的影响至关重要;由于葡萄球菌、链球菌对氯霉素、红霉素、复方新诺明等药物甚为敏感,因此,目前在临床上发生葡萄球菌、链球菌性奶牛乳房炎时可首选此类抗菌药物来进行治疗,同时还须加强饲养管理,改善卫生条件,以提高动物机体的抵抗力。     

奶牛撑起的家业

来到滇西北洱海源头的江尾镇,沿着弥苴河向洱海方向走去,远远便能看到河岸立着一幢幢色彩明亮、造型古朴的农家宅院。据同行的洱源朋友王绍荣说,这些星罗棋布的白族农家宅院多数是奶牛养殖户。 造养奶牛不仅能维持生计,而且还能建盖一幢幢农家“别墅”,这是我没有料想到的。 大热的天,我们来到了河尾村河东一社,一眼望去,沿河岸的小道旁,几十米长的小木架上挂满了像纱一样的东西,白晃晃的,在明媚阳光照耀下,分外抢眼。走近一看,方知这是晾晒着的粉丝,物主名叫段右全,这幢紧挨着的农家“别墅”就是他的家。 就这样,我们似乎…     

奶牛乳房炎三种主要链球菌多重PCR检测方法的建立

链球菌是引起奶牛乳房炎的重要病原菌,其中无乳链球菌(S.agalactiae)、停乳链球菌(S.dysgalactiae)和乳房链球菌(S.uberis)是奶牛乳房炎主要的致病性链球菌。为同时、快速地检测牛奶样品中这3种重要链球菌,本研究根据无乳链球菌sip基因、停乳链球菌Mig基因及乳房链球菌pauA基因设计特异性引物,同时以细菌16S rRNA基因为内参,建立了多重PCR检测方法,并进行条件优化。结果显示,该方法最佳退火温度为58℃,最佳扩增循环数为25个循环,本方法同时检测无乳链球菌、停乳链球菌及乳房链球菌时,检测限分别为1×10³CFU/m L、1×10³CFU/m L及1×10⁴ CFU/m L,灵敏性高。该方法对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌、单核细胞增生李斯特菌等10种菌均无交叉反应,特异性好。模拟样品结果显示,当奶样中3种菌的初始浓度均为1 CFU/m L时,37℃增菌6 h即可检出乳房链球菌,增菌8 h以上3种菌可全部检出。结果表明,该多重PCR检测方法具有较好的特异性和灵敏性,对同时快速检测...     

李德华的致富经

正走进李德华的温室大棚,看到的是葱葱绿绿的青菜、芹菜、韭菜……到处都是绿油油的一片;走进李德华的家舍禽圈,看到的是嗷嗷待哺的小牛崽和悠然自得的老母猪,到处都是生机盎然;走进李德华门前的自用地,看到的是一行行的小树苗茁壮成长,才知那是块育苗基地。也就是这座棚、这圈畜、这块地,使李德华从一贫如洗成为"师市十大     

国务院办公厅关于印发国家中长期动物疫病防治规划(2012—2020年)的通知

国办发[2012]31号各省、自治区、直辖市人民政府,国务院各部委、各直属机构:《国家中长期动物疫病防治规划(2012—2020年)》已经国务院同意,现印发给你们,请认真贯彻执行。     

廷·巴特尔的新牧区建设

我衷心地盼望我的第二故乡不再遭受沙尘暴的袭扰,不再贫困落后。我祈盼着这片曾经美丽的家园在我们的手中变得更加美丽,让纯朴善良的牧民兄弟生活得富足安康。——廷·巴特尔     

塞上沃土追梦人

一个冬日的清晨,在银川市金凤区良田镇魏家桥村孙丽霞的奶牛养殖场里,又一个新生命诞生了。看着这头初生的小牛犊和满场子的奶牛,女主人的脸上挂满了笑容。2001年秋天,孙丽霞拿出了多年的积蓄,又贷款10万元,在自家庭院