Asia 1型口蹄疫病毒多表位基因的原核表达及ELISA 检测方法的建立

根据国内流行的Asia 1型口蹄疫病毒的基因组特性,合成了Asia 1型口蹄疫病毒2个流行毒株VP1基因的5个抗原表位,并将其克隆到pMDl8-T载体上,再按设计的酶切位点连接,构建出Asia 1型口蹄疫病毒VP1双拷贝基因片段(VPlAsia).然后,将VP1Asia基因连接到原核表达载体pET-28a(+)上,构建了重组表达质粒pET-28a-VPlAsia,接着将其转入BL21茵中进行原核表达.以纯化的表达蛋白作为抗原检测了牛Asia 1型口蹄疫病毒阳性血清.结果显示,VPIAsia基因在大肠杆菌中获得了高效表达,以纯化的VPIAsia蛋白作为抗原建立了检测Asia 1型口蹄疫病毒抗体的ELISA方法.以建立的ELISA方法和标准Asia 1型口蹄疫液相阻断ELISA试剂盒对30份临床样品进行了检测,两种检测方法的阳性率分别为90.0% (27/30)和93.3%(28/30),符合率为89.7%(26/29).本研究为组装Asia 1型口蹄疫病毒抗体ELISA诊断试剂盒奠定了基础.     

Asia 1 型口蹄疫病毒多表位基因的设计及其在毕赤酵母中的表达

为制备Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)特异性诊断抗原,根据国内Asia 1型FMDV流行毒株的序列,合成了2个FMDV流行毒株VPl基因的5个抗原表位.采用Insight Ⅱ软件进行蛋白空间构象模拟,证实设计的多表位分子结构符合要求.将合成的多表位基因按设计的酶切位点进行酶切连接,构建了Asia 1型FMDV VP1双拷贝基因重组质粒(pMD18-dVP1Asia).从该重组质粒获得dVP1Asia基因,与毕赤酵母表达载体pPIC9K连接,构建了重组表达质粒pPIC9K-dVP1Asia.用BglⅡ将重组表达质粒线性化后,转化GS115酵母菌.经筛选、鉴定,成功获得了表达FMDV多表位VP1蛋白的阳性重组酵母茵.该阳性重组酵母茵经甲醇诱导,在培养液上清中可检测到目的蛋白.Western-blot结果显示,该蛋白能特异识别Asia 1型FMDV抗体,且具有很好的反应原性.     

停乳链球菌GapC的免疫特性分析及B细胞抗原表位的筛选与鉴定

旨在表达牛乳源停乳链球菌3-磷酸甘油醛脱氢酶（GapC）,预测并鉴定其B细胞抗原表位。本研究采用PCR扩增停乳链球菌GapC基因,构建重组质粒p ET-28a-TR-X16087-2。经IPTG诱导表达后纯化GapC蛋白,并以纯化的GapC蛋白免疫小鼠,采用ELISA方法检测Ig G抗体效价及抗体分型,分析对小鼠的免疫保护效力。结果显示,成功表达了大小为44 ku的GapC蛋白,对小鼠的免疫保护率为76%。预测并筛选出3个B细胞抗原表位,鉴定了1个优势抗原表位BP3:196PHRGGDLRRARAGAAN206。上述结果表明,本研究成功表达了停乳链球菌GapC蛋白,对其免疫效果进行了评估,预测与鉴定了其B细胞表位,为GapC蛋白功能和表位疫苗的研究奠定了基础。     

品位

性感麦当娜 2005年10月18日,美国纽约, 电影《I Will Tell You A Secret》 举行首映礼。著名歌手 麦当娜(Madonna)身穿 黑色套装端庄亮相,颈 间的钻石项链以及金发 上的钻石发带熠熠放光 彩。     

新合同范本下商品房交付条件立法完善

2014年住房和城乡建设部、工商总局联合发布了新版《商品房买卖合同（预售）示范文本》,对2000年发布的范本作了一些修订,解决了部分争议。但是合同范本不能替代立法,我国应当明确立法规定工程竣工验收备案表、房屋质量、基础设施设备和公共服务配套设施为商品房交付条件,并明确规定取得该备案表应提交的文件。     

澜沧江畔姊妹乡

“姐在江上游,妹在水下方。常来复常往,情似江水长。”这是澜沧江畔大理白族自治州云龙县表村傈僳族乡与相邻的澜沧江上游的怒江傈僳族自治州兰坪白族普米族自治县兔峨乡一带流行的一首民谣。表村乡的人口主要为傈僳族、白族和汉族,兔峨乡的人口主要为傈僳族、怒族和白族,这首民谣道出了两个乡各族群众之间山岭相连、一衣带水的亲密关系。兔峨乡的街子天是星期天,表村乡的街子天是星期一。两个乡政府所在地也就是两个街子之间相距17公里。每逢两个乡的街子天,两个乡的群众就相互赶集。表村乡的蔬菜、粮食种得好,仔猪育得好,这是兔峨乡群众最…     

公司担保无效责任的复位 ——基于责任性质、主体与效果的区分视角

在实践中,即使公司担保行为无效,公司仍然普遍须承担实质上类似有效担保的责任。这一不合理现象的原因在于法院对过错的不当界定乃至强加。以过错为线索,可以区分担保无效责任在性质和主体上的不同层次。在性质上,当担保合同自身无效时,公司承担缔约过失责任;在担保合同因主合同无效而无效时,公司只承担故意侵权责任。在主体上,行为归属要先于过错判断,当代表人行为可约束公司时,公司承担责任;否则由代表人自行承担责任,公司无须承担替代责任。责任主体的区分会进一步导致担保行为"无效"和"不生效力"的区分。性质和主体的区分会相应校正担保无效责任的范围,并排除追偿权。唯有使公司担保无效责任回归一般体系,才能避免过度强调或者不当忽略公司担保的特殊性。     

抗原表位鉴定方法的研究进展

抗原表位作为具有重要生物学和免疫学的功能基团是制备单克隆抗体、疫苗研制、诊断试剂和药物开发等方面研究的靶标物质.对抗原表位的深入发掘和研究有助于新型药物开发、研发诊断制剂及方法和设计新型疫苗.随着分子信息学、基因组学和蛋白质组学等交叉学科的快速发展,针对预测和筛选不同抗原表位发展了一系列全新的抗原表位方法和模型,极大简...     

改革开放以来中国农业投入产出水平定量研究——一种基于灰色优势分析的研究方法

农业投入产出水平可以从两个方面进行衡量,一是农业投入产出的规模水平;二是农业投入产出的效益水平。灰色优势分析能够在排除主观因素干扰的情况下对农业投入产出水平评价指标进行赋权,提升了评价体系的可信度。农业产出指标和投入指标的关联序分别表征了各评价指标在衡量农业投入产出水平时的代表性强弱。经测算,1981-2010年,中国农业投入产出规模指数总体上不断走高,但1995年以前主要依靠产出拉动,此后主要依靠投入拉动;农业投入产出效益指数先正后负且呈现＂S＂形波动,意味着中国农业生产发展已先后摆脱＂高效益、低水平＂和＂高水平、低效益＂的非良性状态,开始步入＂高效益、高水平＂的良性发展轨道。     

专统金融业的创新挑战

不难看出，传统的金融机构已经更加重视新兴金融模式对其带来的影响，并逐渐加快自身的改进步伐。越来越多的信息表明，传统银行正试图利用网络银行手段来改造自身