犬瘟热病毒野毒株与疫苗株联合RT-PCR鉴别方法的建立

为了建立快速、有效的鉴别犬瘟热病毒(CDV)野毒株与疫苗株的诊断方法,根据CDV野毒株与疫苗株N基因的保守区域以及H基因的多变区域设计特异性引物,建立了区分CDV野毒株与疫苗株的联合RT-PCR方法.结果表明,针对N基因的RT-PCR方法能同时检测CDV野毒株与疫苗株;而针对H基因的RT-PCR方法只能检测CDV野毒株,不能检测CDV疫苗株.根据2次RT-PCR反应结果,能够很好地区分CDV野毒株与疫苗株.同时,经过病毒电镜观察和H基因扩增片段的克隆测序结果的比对,进一步确认了该方法的特异性.表明,该方法具有快速、特异、实用等优点,可作为CDV鉴别诊断的有效手段.     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗的研制

将高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒致弱株TJM株与耐热冻干保护剂混合制备弱毒活疫苗,并对该活疫苗进行安全性、免疫保护效果和保存期试验。结果显示,4～5周龄仔猪接种该疫苗后体温正常,无任何临床可见异常。该疫苗接种猪对强毒攻击的保护率达4/5以上;将其置于2～8℃保存24个月,病毒效价降低不超过100.5 TCID50/mL。表明该疫苗对猪安全,免疫保护效果良好,且便于保存。     

鸡鲍氏志贺菌与痢疾志贺菌鸡白痢沙门菌及肠致病性大肠杆菌RAPD鉴别方法的建立

利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对鸡鲍氏志贺菌、鸡白痢沙门菌、肠致病性大肠杆菌和痢疾志贺菌的基因组DNA进行了研究,在此基础上分析了鸡鲍氏志贺菌与其他6个菌株的亲缘关系.结果显示,有4条随机引物的扩增多态性良好,共扩增出了64个DNA片段,其中4种菌共有的谱带有3条,而显示多态性的片段有61条,占95.3%.引物P2的扩增图谱不能将志贺菌和大肠杆菌鉴别开,但可将这2种菌与沙门菌鉴别出来;引物P6的扩增图谱清晰且3种菌间有明显差异,可用于上述3种细菌的鉴别.不同细菌间的遗传距离为0.128～0.790,根据遗传距离可将鸡鲍氏志贺菌等7个菌株分为3个聚类群,鸡鲍氏志贺菌分离株位于人痢疾志贺菌类群中,可能是人志贺菌的一个新的亚种.     

上海为什么不能“躺平”?

奥密克戎变异株绝不是“大号流感”,其平均病死率是普通流感的7到8倍,老年人群特别是80岁以上的老年人群病死率超过10%,是普通流感的近百倍。席卷全球的新冠疫情已经肆虐了两年多,各国的防控策略也有不同,简单分类就是“躺平”或“动态清零”。     

鉴别检测野生株和基因缺失株非洲猪瘟病毒多重荧光定量PCR方法的建立

为建立一种鉴别检测野生型和基因缺失株非洲猪瘟病毒(ASFV)的方法,本研究根据GenBank中登录的ASFV P72、CD2v、MGF360-14L基因保守序列设计引物和探针,通过方阵法优化体系后,建立了一种可以同时检测P72、CD2v、MGF360-14L基因的多重荧光定量PCR方法.该方法与伪狂犬病病毒(PRV)、...     

猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区编码基因的原核表达及其单克隆抗体的制备

利用RT-PCR扩增了猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒疫苗株(C株)的E2蛋白主要抗原区(tE2)编码区,并定向克隆到表达载体pPROEX-HTb中,获得重组表达载体pPROEX-tE2,将其转化大肠杆菌DH5α菌株,经IPTG诱导,tE2蛋白获得高效表达;经检测,该重组蛋白能被CSFV C株抗血清识别.用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了1株稳定分泌抗tE2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株.经检测,该单克隆抗体能够与CSFV C株和石门株以及杆状病毒表达的重组E2蛋白发生特异性反应.推测,该单克隆抗体是针对CSFV E2蛋白的一个保守线性表位.     

植物源蜡样芽胞杆菌在动物体内的生物效应

对植物源蜡样芽胞杆菌FS株在动物体内的生物效应进行了研究。结果 ,饲喂FS菌液的断奶仔猪粪便中大肠埃希氏菌、肠球菌明显减少 ,而乳酸菌、双歧杆菌增多 ;断奶仔猪饲喂FS菌液 30d ,日增重比对照组增加 33.6 3% ,腹泻发生率比对照组降低 5 7.14 % ;血清总球蛋白提高4 .80 % ,SOD提高 7.70 % ;以FS 0 .2 5亿菌 /mL给小白鼠饮水 4 0d ,脾指数提高 118.98% ;小白鼠安全试验观察 15d ,未出现死亡 ,饲喂断奶仔猪 30d ,未出现不良反应 ,显示FS菌株安全性好。     

嗜肾型鸡传染性支气管炎W93株活疫苗的研究及其S1基因的克隆与序列测定

利用鸡胚分离法由发生肾病变型传染性支气管炎 (IB)的病鸡分离到嗜肾型传染性支气管炎病毒 (NIBV)W株 ;再通过SPF鸡胚连续传代 ,获得了NIBV疫苗毒株W93;继而借助RT PCR法扩增了其S1基因 ,并测定了S1基因的核苷酸序列 ,分析了与相关毒株间的同源性。结果显示 ,W93株在鸡胚中的病毒产量达 10 7.8EID50 /0 .1mL ,适用于所有日龄的雏鸡 ;W93S1基因的核苷酸序列与马萨诸塞型的M4 1株、H52 株和H12 0 株的同源性很高 ,分别为 96 .9%、96 .8%和 97.1%。表明 ,W93可作为制备IB弱毒疫苗的毒株     

产单核细胞李氏杆菌突变株的感染动力学研究

以BALB/c小鼠为实验动物模型,对actA基因和plcB基因双缺失的产单核细胞李氏杆菌(LM)yzuLM1-2菌株进行感染动力学研究。分别用减毒突变株yzuLM1-2和野生型菌株yzuLM4给BALB/c小鼠静脉注射或灌服,并对脏器中LM的分布动态进行测定。结果显示,在显著高于野生型菌株感染剂量的条件下注射或灌服接种后,减毒突变株组小鼠肝和脾中的LM数量迅速下降,被清除的速度显著快于野生型菌株组。溶血素(LLO)抗体的测定结果显示,减毒突变株菌能和野生型菌同样激发较高水平的抗体。小鼠免疫保护试验结果显示,减毒突变株免疫组对同种血清型LM的攻击具有较好的免疫保护力,可达100%。结果表明,yzuLM1-2突变株侵袭力下降,致病力降低,能激发较高水平的抗体产生,可以作为预防动物李氏杆菌病的候选疫苗菌株,并为用作运送外源保护性抗原的载体提供了材料。     

薄层琼脂方法检测结核分枝杆菌分离物对利福平、氧氟沙星和卡那霉素的耐药性

背景:在低收入国家迫切需要经济的方法检测结核分枝杆菌对抗结核药物的敏感性。目的:评估薄层琼脂方法(thin-layer agar,TLA)快速检测结核分枝杆菌临床分离物对利福平(RMP)、氧氟沙星(Ofx)、卡那霉素(Km)的耐药性;与金标准比较,评估该方法的敏感度、特异度以及阳性结果的报告时间。方法:共纳入147份结核结核分枝杆菌临床分离物。进行TLA方法时,采用含有RMP,Ofx及Km的7H11琼脂培养基的四象限平皿。TLA方法RMP耐药性结果与Bactec MGIT960结果进行比较,TLA方法检测Ofx和Km耐药性结果与比例法的耐药性结果进行比较。结果:RMP和Ofx的敏感度和特异度均为100%,KM的敏感度和特异度分别为100%和98.7%。使用TLA四象限平皿方法可以快速(中位数为10 d)检测3种抗结核药物(RMP、Ofx、Km)的耐药性。结论:对于检测所研究的3种药物的耐药性,LTA是1种准确的方法。这种快速的方法操作简便,为资源有限、不能应用复杂技术的国家提供了一种替代的方法。