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151.
小反刍兽疫病毒非结构蛋白V基因的克隆及其编码蛋白的结构与功能 总被引:1,自引:0,他引:1
采用RT-PCR技术从小反刍兽疫病毒总RNA中扩增到P基因一段896bp序列,克隆至pET-30a(+)载体中,对其进行最大开放阅读框691位定点突变(插入一个G碱基),获得小反刍兽疫病毒V基因,利用生物信息学软件对麻疹病毒属V蛋白氨基酸序列进行比对,同时使用I-TASSER服务器对小反刍兽疫病毒V蛋白三级结构进行同源建模,分析其结构与功能。结果显示,小反刍兽疫病毒V蛋白氨基酸序列与麻疹病毒、犬瘟热病毒、牛瘟病毒和海豹瘟病毒V蛋白的相似性分别为61.1%、56.0%、61.7%和51.7%,三级结构预测显示V蛋白由多α-螺旋的N-端结构域、中间结构域和含锌指结构的C-端结构域组成。本研究成功克隆了小反刍兽疫病毒V基因,预测分析了V蛋白结构和功能的关系,为其分子生物学和功能的进一步研究奠定了基础。 相似文献
152.
将目的基因NP亚克隆入原核表达质粒pET-28(a)中,构建了重组表达载体pET-28(a)-S-NP,然后用重组质粒转化BL21(DE3)感受态细菌,并利用IPTG诱导蛋白表达。将表达的蛋白利用His-Band Ni+柱进行亲和层析纯化,Western-blot鉴定表达蛋白。结果显示,重组质粒经双酶切后可得到与目的片段长度相同的特异性条带;测序结果显示此特异性条带与参考序列完全匹配,没有突变。纯化后的蛋白经SDS-PAGE和Western-blot鉴定,表达正确。结果表明,成功构建了重组表达质粒,且表达产物正确。 相似文献
153.
针对猪脑心肌炎病毒(EMCV)非结构蛋白2C基因设计合成了1对特异性引物,通过RT-PCR扩增得到了2C基因片段.将2C基因定向克隆入原核表达载体pGEX-6P-1中,构建了重组原核表达质粒GEX-6P-2C,并将其转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经用0.1 mmo1/L IPTG诱导,成功表达了62 ku的目的重组蛋白.Western-b1ot分析表明,表达的2C重组蛋白可以分别被猪源或兔源抗EMCV阳性血清识别;以浓度为0.5μg/mL的重组蛋白包被聚苯乙烯微量反应板,能够特异性地检测到猪抗EMCV抗体.证明表达的EMCV重组非结构蛋白2C具有良好的反应原性,可以替代EMCV全病毒进行安全、特异、敏感的基于重组诊断抗原的猪脑心肌炎血清学检测技术研究. 相似文献
154.
为有效预防肠毒素性大肠杆菌(ETEC)引起的犊牛和羔羊腹泻,将PCR扩增获得的ETEC K99菌毛抗原基因和人工合成的ST1基因片段,借助pUCm-T载体,构建了重组质粒pUCm-K99-ST1,从而获得了融合基因K99-ST1;使用EcoR I Sal I双酶切将该融合基因定向插入表达载体pET-30a中,成功构建了表达载体pET-K99-ST1,将其转入表达茵株BL21(DE3)中,经IPTG诱导,获得31 ku的蛋白;Western-blotring结果显示,该融合蛋白可与K99阳性血清发生特异性反应. 相似文献
155.
156.
大鼠死后心肌和肺脏微管蛋白降解规律的初探研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨大鼠死后心肌和肺脏微管蛋白(tubulin)的降解规律与死亡时间(PMI)的关系。方法大鼠经切断股动脉致失血性休克处死后,置于RXZ智能型人工气候箱内,实验条件设定为:20℃恒温,湿度50%。分别于大鼠死后0、1、2、3、5和7d时剖取心肌和肺脏组织,应用Western-Blot法检测心肌和肺脏tubulin的含量,并对所得数据进行统计学分析。结果Tubulin在正常大鼠心肌和肺内高表达,死后1d时其含量已开始下降,至死后7d时仍可检测到微管蛋白的存在,但tubulin在肺脏内的降解速度快于心肌。两种组织内tubulin含量随PMI变化的回归方程及相关系数分别为:心肌Y=-1726.Ix+14083,r=0.9684;肺脏Y=-1439.89x+12041,r=0.9808。结论大鼠死后心肌和肺脏tubulin的含量逐渐减少,与PMI具有相关性。 相似文献
157.
158.
实验性大鼠脑震荡后C—FOS蛋白表达的研究 总被引:4,自引:2,他引:2
目的探讨原癌基因c-fos的表达和脑震荡性损伤的关系,同时寻找脑震荡后法医病理学的诊断依据。方法55只实验大鼠随机分为脑震荡组和对照组。用免疫组织化学SABC法观察大鼠脑震荡后脑内C-FOS蛋白表达的变化规律。结果对照组大鼠未见C-FOS蛋白的表达。然而脑震荡组损伤后15min即可在神经细胞观察到C-FOS蛋白的表达,随着损伤后经过时间的延长,表达C-FOS蛋白的细胞数及范围逐渐扩大,损伤后6h表达达高峰,直至损伤后96h均有大量C-FOS蛋白表达。结论 c-fos原癌基因的检测可成为诊断脑震荡和推断脑震荡后经过时间的一项敏感指标。 相似文献
159.
热休克蛋白的分类,基因调控及其功能 总被引:4,自引:0,他引:4
已往研究发现,所有生物体细胞在环境温度突然升高时,会发生一种非常相似的反应,最初称之为热休克反应(heash。kresPOns),其典型表现为细胞内一组蛋白质的表达迅速增加,乃将其命名为热休克蛋白(Heatshockproteins,HSPs)。随后,人们发现热休克反应除了能被热损伤所诱导外,也能被其他因素诱导,其中包括:氨基酸类似物、各种重金属、代谢性毒物、缺血、缺氧、损伤等。目前认为各种应激因子引起的热休克反应更确切地应称为应激反应(stressresronse),是一种以基因表达和调控方面变化为主的细胞应激反应,热休克蛋白应称为应激… 相似文献
160.
大鼠闭合性脑损伤后血清髓鞘碱性蛋白研究 总被引:1,自引:0,他引:1
用ELISA双抗体夹心方法研究了大鼠闭合性弥漫性脑损伤后,血清髓鞘碱性蛋白(MBP)含量的时序变化。正常大鼠血清中MBP为6.1633±1.5301ng/ml(X±S)。伤后立即死亡组大鼠的血清MBP为11.3818±2.6574ng/ml,伤后15min,为10.8319±2.3135ng/ml,此血清高MBP水平一直持续到伤后3天。伤后第4天和第5天,血清MBP基本恢复到正常水平。立即死亡组、伤后15min组和伤后3天之内各组的MBP水平与正常组和伤后第4天和第5天的比较,P<0.01。认为可进一步探讨将血清MBP含量的检测,作为脑震荡性脑损伤的辅助生化诊断指标之一 相似文献