大鼠脑外伤后大脑皮质脑红蛋白的定量研究

目的探讨脑外伤后大脑皮质脑红蛋白(Ngb)随时间变化的规律及其法医学意义。方法自由落体硬膜外撞击法复制大鼠中度颅脑损伤模型,采用免疫组化方法和图像分析技术观测脑外伤后不同时间损伤区大脑皮质、损伤周半影区以及损伤对侧皮质的Ngb免疫组化反应及其阳性信号灰度值和阳性信号面积,并对所测数据进行统计学分析。结果脑外伤后大鼠损伤区大脑皮质Ngb阳性反应细胞迅速减少,伤后24h降至最低,至16d维持在较低水平;损伤周半影区Ngb阳性反应细胞迅速增加,伤后12h达高峰,随后逐渐减少,至8d及16d恢复至正常水平;损伤区大脑皮质Ngb阳性信号低于对侧大脑皮质,损伤周半影区Ngb阳性信号强于对侧皮质。结论脑外伤后大鼠大脑皮质Ngb阳性反应细胞随时间延长呈现区域性的增多或减少。     

藏绵羊朊蛋白基因的原核表达

从藏绵羊全血中提取基因组总DNA,用所设计的引物以聚合酶链式反应扩增出细胞型朊蛋白(PrPc)基因。测序分析表明,所克隆的羊PrPc基因片段大小为771 bp,包含了羊朊蛋白基因的完整编码区序列,其与国内外报道的序列基本相同。将目的基因与经EcoRⅠ和XhoⅠ酶切的载体pGEX-4T-1连接后转化宿主菌BL21(DE3),挑选重组阳性菌用IPTG诱导表达,收集不同培养时间的菌液进行SDS-PAGE和Western-blotting。结果表明,PrP基因在大肠杆菌中成功表达,并能被抗牛PrPc单抗4C11识别。凝胶薄层扫描结果显示,表达蛋白约占菌体总蛋白的30%~45%,目的蛋白以包涵体的形式存在,包涵体经变性裂解、纯化和复性后得到具有一定生物学活性的目的蛋白。     

用酶免疫斑点法快速检测精浆特异蛋白P_(30)鉴定人精斑

作者用自制的辣根过氧化物酶标记的抗精浆特异蛋白P_(30) 单克隆抗体,建立了简便快速检测精斑中P_(30) 鉴定人精斑的斑点法。通过颜色变化判定结果,阳性为紫蓝色斑点,阴性为无色。结果表明,仅人类精斑和前列腺浸液出现阳性斑点,人体其他体液及组织器官浸液均为阴性。对动物血、精斑也无交叉反应。标定精斑稀释到1600倍亦可得到阳性结果。     

双峰驼精清蛋白图谱及分子量的测定

采用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）观察了双峰驼精清及其对照组牛、羊、猪精清电泳蛋白图谱，测定了各蛋白组份的分子量。结果表明，双峰驼精清在分子量７２３９０～１２８８１Ｄ间形成１７条蛋白区带，在７２３９０～４３１７７Ｄ间，与牛、羊、猪精清蛋白图谱相似；但在较小分子量中，在分子量为４０６８５，２０８４４及１５６９３．３Ｄ的三条蛋白区带处，有与牛精清蛋白位置上相近的蛋白区带，但含量及分子量尚有差异。     

鸭源H9N2亚型流感病毒NS基因的克隆及表达

根据GenBank中收录的H9N2亚型流感病毒的NS基因序列设计合成了 1对引物NSU/NSL ,利用RT PCR扩增出了H9N2株NS基因 ;将该基因片段克隆到 pMD 18 T载体上 ,并对所得到的重组质粒进行酶切分析及序列测定。结果 ,获得了NS基因片段的阳性重组子 ,扩增的NS基因包含NS1基因完整的阅读框架和部分NS2基因 ,其序列与GenBank中收录的其他分离株NS基因比较 ,同源性达 96 %～ 99%。再将克隆的NS基因插入到原核表达载体 pET 2 8a后 ,转化E .coliBL2 1(DE3)感受态细胞 ,在IPTG诱导下获得了预期的蛋白表达 ,所表达蛋白质的分子质量约为 30ku。     

猪水泡病病毒非结构蛋白编码区的克隆与序列分析

以猪水泡病病毒 (Swinevesiculardiseasevirus ,SVDV)HK’70为材料 ,用特异性引物扩增出非结构蛋白编码区的 4个重叠目的片段 ,连接于pMD 18 T载体 ,转化JM 10 9感受态细胞。经对重组质粒双酶切、PCR鉴定、序列分析表明 ,HK’70非结构蛋白编码区核苷酸长 4 0 0 2nt ,氨基酸长 1334aa ;与J1’73、H/ 3’76、SVDV(Seechrn等测株 )、NET/ 1/ 92的核苷酸同源性分别为 98.6 %、98.3%、98.3%、91.2 % ,推导氨基酸序列的同源性分别为 98.9%、99.1%、99.2 %和 97.2 %。     

贵州省传染性法氏囊病病毒野毒株核酸及结构蛋白比较研究

采用氯仿抽提、聚乙二醇沉淀，再经差速离心和蔗糖密度梯度离心，从病变法氏囊组织中提取出较纯的传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）。病毒核酸电泳分析表明，４株ＩＢＤＶ分离株均由双节段ＲＮＡ组成，大小基因片段的电泳迁移率毒株间无差异。ＳＤＳ—ＰＡＧＥ分析表明，ＩＢＤＶ分离株均由４条主要的结构蛋白带组成。近年从免疫鸡群中分离的地方强毒ＪＨ株及引自中监所的血清Ⅰ型强毒Ｊ＿１Ｃ＿７株，其主要结构蛋白带与早年分离的ＩＢＤＶ野毒株相似，电泳迁移率也基本一致。同时观察到毒株间各蛋白带相对百分含量的变化。     

猪瘟病毒E2重组蛋白纯化和复性条件的研究

对猪瘟病毒(CSFV) C株、LT株E2基因主要抗原区在pGEX系列表达载体中原核表达的融合蛋白进行了变性、复性和纯化回收试验。用建立的变性、复性和纯化方法,获得了可溶性的纯化蛋白E2,其纯度达70%,回收率为10%。对复性纯化的E2蛋白进行了免疫活性检测,结果表明,其比未纯化蛋白的免疫活性高20倍左右。     

根据损伤组织中C─反应蛋白的含量及分布推断损伤时间

作者应用酶联免疫吸附分析和免疫组织化学方法，检测大鼠切创创缘C-反应蛋白含量及分布的变化，探讨它们与损伤时间的关系及其来源。结果表明通过检测损伤组织中C-反应蛋白的含量及分布可推断伤后30分钟至5小时内的损伤时间，并证明C-反应蛋白可由肝细胞合成，组织损伤可诱发肝细胞合成C-反应蛋白。     

弥漫性轴索损伤最新研究进展

弥漫性轴索损伤(D iffuse axonal injury,D A l)是指头部遭受钝性外力作用后所引起的以脑白质轴索弥漫性损伤为主要特征的一种脑损伤。损伤后果严重,有学者认为在重型颅脑损伤中D A I占28%～42%,死亡率达42%～62%。A dam s等观察到外伤性重症颅脑损伤患者中有13%～28%为闭合性D A I且并不伴有脑挫伤及明显的脑出血。C ordobes等对78例D A I病人的观察发现,患者死亡率为49%,植物生存状态为15%,重残率为14%,轻残为17%,痊愈仅为5%。D A I不但是临床上诊治的难点,也是法医学鉴定中难以解决的难点。[1]一、D A I动物模型1928年R om on利…