微小隐孢子虫类钙调蛋白基因真核表达质粒的构建及在Hela细胞中的表达

为了构建微小隐孢子虫类钙调蛋白(calmodulin-like protein,CML)基因的真核表达质粒,并在Hela细胞中实现表达,以微小隐孢子虫卵囊cDNA为模板,通过PCR扩增CML基因,插入到克隆载体pMD18-T中。对经鉴定的pMD-CML重组质粒进行双酶切,将目的基因连接到经同样内切酶双酶切的真核表达载体pVAX1上。重组质粒经双酶切分析和测序鉴定后,用FuGENE HD转染试剂介导的方法,将重组表达质粒转染Hela细胞,用Western-blot技术和间接免疫荧光法检测外源基因的表达。结果显示,成功构建了微小隐孢子虫CML基因的真核表达质粒pVAX-CML,重组质粒在Hela细胞中实现了表达,表达产物具有良好的反应原性,为研究CML的特性和功能、寻找新的防控技术奠定了基础。     

环形泰勒虫微线体-棒状体基因的原核表达及表达产物的免疫原性分析

为了解环形泰勒虫微线体-棒状体蛋白的生物学特性,通过生物信息学分析,选取环形泰勒虫微线体-棒状体蛋白特异性和抗原性最高的一段开放阅读框进行RT-PCR扩增,将所获基因片段连接到原核表达载体pGEX-4T-1中进行表达,将表达产物纯化后免疫家兔制备该蛋白的多克隆抗体。通过SDS-PAGE和Western-blot分析该基因的原核表达情况和表达产物的反应原性。生物信息学分析发现,该蛋白第470~650位氨基酸残基的特异性和抗原性最高。对诱导条件的摸索发现,在37℃、1.0mmol/L IPTG条件下诱导6h表达量最高,表达产物大小为43ku。Western-blot结果显示,该蛋白能被环形泰勒虫阳性的牛血清所识别,具有很好的反应原性。本研究制备的多克隆抗体为后期研究微线体-棒状体蛋白与宿主细胞的相互作用奠定了基础。     

旋毛虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的克隆与生物信息学分析

为了研究旋毛虫硫氧还蛋白过氧化物酶的功能,对GenBank中旋毛虫基因组数据库和旋毛虫EST数据库进行检索,获得旋毛虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的cDNA序列并设计引物。以旋毛虫肌幼虫总RNA为模板,进行RT-PCR,将PCR产物克隆到pMD18-T载体后测序并进行生物信息学分析。结果显示,成功克隆到3个旋毛虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的cDNA序列(TsTPx1,TsTPx2,TsTPx3)。TsTPx1cDNA含有1个由747个核苷酸组成的完整的开放阅读框,编码248个氨基酸残基组成的多肽,蛋白质的理论分子质量为28.2ku,理论等电点为9.00。TsTPx2cDNA含有1个由588个核苷酸组成的完整的开放阅读框,编码195个氨基酸残基组成的多肽,蛋白质理论分子质量为22.1ku,理论等电点为6.52。TsTPx3cDNA含有1个由594个核苷酸组成的完整的开放阅读框,编码197个氨基酸残基组成的多肽,蛋白质理论分子质量为22.4ku,理论等电点为6.08。TsTPx1、TsTPx2、TsTPx3都具有1个AhpC-TSA结构域和1个1-cys Prx_C结构域。同源性分析表明,TsTPx1、TsTPx2、TsTPx3与其他线虫硫氧还蛋白过氧化物酶的一致性在60%左右。     

双手第1骨间背侧肌代谢物的氢质子磁共振波谱

目的 探讨氢质子磁共振波谱（1H-magnetic resonance spectroscopy,1H-MRS）检测技术在尺神经损伤预后评估的应用前景.方法 对12例健康青年志愿者、1例尺神经完全损伤者双手第1骨间背侧肌的代谢物进行1H-MRS检测,对采集到的数据进行统计分析. 结果 健康女性成年人第1骨间背侧肌的细胞外脂质（extra-myocellular lipids,EMCL）峰下面积高于男性（P＜0.05）,胆碱、肌酸、细胞内脂质（intra-myocellular lipids,IMCL）在两性间差异均无统计学意义（P＞0.05）,双手间各峰下面积差异均无统计学意义（P＞0.05）.尺神经损伤者患侧EMCL峰较健侧偏高,且FDI面积缩小.结论 1H-MRS对肌肉代谢物的无创性以及定量检测对周围神经损伤的预后评估具有一定价值.     

快速溶剂萃取-气相色谱-质谱联用法分析血液中的农药

目的：建立生物检材血液中农药的快速溶剂萃取（accelerated solvent extraction,ASE）法。方法通过优化ASE萃取条件,考察萃取温度、时间和萃取剂对回收率的影响,提取血液中的农药进行气相色谱-质谱联用（GC/MS）法定性定量分析。结果血液中8种农药的平均回收率在70.6%~92.4%,变异系数小于5.0%,8种农药在0.5~5.0μg/mL的浓度范围内线性良好。结论该方法具有操作简便快捷、回收率高、重现性好等特点,可用于农药的提取检验。     

民事诉讼诉讼标的理论之研究——以未来民事诉讼之发展方向为中心

正民事诉讼,就诉讼标的之意涵应如何理解,于学说上产生甚大之争论。尤其在民事实体法上发生请求权竞合或形成权发生竞合之情形,于诉讼法其诉讼标的为何,究构成几个诉讼标的,存在甚多不同之理解。台湾地区实务上目前在通常诉讼程序仍采用旧诉讼标的理论之立场,学说上则有主张采用旧诉讼标的理论或诉讼标的相对论之见解,亦有主张采用新诉讼标的理论两个构成要素或一个构成要素理论之见解。值得留意者,于德国之长期立法上、学说上与实务上乃     

打造国家向西开放的“桥头堡”———银川综合保税区建设一瞥

正2013年,是银川综合保税区人值得自豪的一年。在实现了"审批快、建设快"的目标后,银川综合保税区继续创造着"银川速度",顺利封关运行。2013年12月29日,银川综合保税区迎来第一批进出口业务,标志着银川综合保税区所有进出口业务正式开启。封关运行,意味着银川综合保税区实现了当年开工、当年建成、当年验收、当年封关的奋斗目标,为"见效快"迈出了坚实的一步,为宁夏实现内陆外向型经济跨越式发展、形成国家向西开放的"宁夏通道"开启新的航程。     

论西南民族地区集贸市场的历史形成

本文运用民族学与历史学资料对普遍存在于我国西南民族地区的市场形态———集贸市场的形成与演变做了具体的论述 ,包括自然环境、经济文化类型的影响及其历史概貌。     

中小企业集群的形成及竞争优势探讨

中小企业集群作为企业与产业组织的一种形态,由于具有集群竞争优势及对市场环境变化的迅速适应能力正引起区域经济学、产业经济学等方面研究学者的不断关注,一些国家的政策制定者也把发展重点转向发展中小企业集群网络,并通过鼓励中小企业间的合作来提高竞争能力。     

一方水土出一方官

一方水土养一方人,也出一方官,这“水土”说的就是风吹雨打、日积月累的地域文化。土壤、气候、饮食习惯等方面因素对一个区域内某一群体性格形成也是很重要的,比如我们这期所关注的古代四川官员。