顶空气质联用法测定腐败血、肝检材中CO

目的研究CO中毒腐败血、肝组织检材中CO的HS/GC/MS检测。方法用HS/GC/MS法分析碳氧血红蛋白(COHb)血的线性范围。配制10%、30%、50%、70%浓度COHb血样,分别在室温、冷藏、冷冻条件下保存,分别在当日、第4、14、45d进行测定,比较实验结果。腐败肝组织由雄性健康家兔通CO气体致死,当天解剖,家兔肝常温隔绝空气保存并放35d至腐败,期间进行不定期顶空测定分析。结果制备的COHb血在0-100%之间有良好的线性关系Y=2.4X+2.2(r=0.9995)。以此方法测定家兔CO中毒致死的COHb新鲜血的浓度和4℃下放置45dCOHb腐败血,结果表明温度对血样中COHb%的测定影响最大。采用HS/GC/MS法检测,每次只需0.25ml血样或1g肝脏,分析一次时间只需3min,均可检测出新鲜检材和常温放置45d的腐败肝组织检材CO的含量。结论HS/GC/MS法能检出CO中毒的腐败生物检材中CO。     

双镜联合序贯中药治疗肝外胆管结石术后肝郁脾虚型患者40例临床观察

目的 观察腹腔镜、术中胆道镜双镜联合序贯中药治疗肝外胆管结石术后肝郁脾虚型患者的临床疗效，为胆道术后围手术期应用中药提供依据。方法 选取安徽中医药大学第一附属医院普外科2019年1月至2021年12月住院的肝外胆管结石患者40例，将患者随机分为观察组与对照组，每组20例。对照组患者采用双镜联合的术式加常规术后西药治疗；观察组在对照组的基础上，术后加服补中益气汤联合四逆散加减。观察患者的临床疗效，中医证候分级量化积分，胆汁引流量，炎性指标：白细胞计数、中性粒细胞百分比、超敏C-反应蛋白、血清白三烯B4，肝功能及血清胆汁生化指标。结果 治疗后临床疗效方面，对照组和观察组总有效率分别为90.00％和95.00％，差异无统计学意义。中医证候分级量化积分方面，观察组各项积分均明显低于对照组（P＜0.05）。同时相比T管胆汁引流量，观察组患者术后第5 dT管胆汁引流量即开始出现明显减少，相比对照组，引流量改善具有统计学意义（P＜0.05）。炎性指标方面，两组患者各项指标均得到改善，与对照组相比，观察组各项指标改善更明显（P＜0.05）。肝功能及血清胆汁生化指标方面，观察组各指标改显著善优于对照组（P＜0.01）。结论 补中益气汤联合四逆散加减对双镜联合治疗肝外胆管结石肝郁脾虚型患者临床疗效显著，有效地改善临床症状和体征，改善肝功能，减轻术后炎性反应，减少胆汁淤积，临床应用安全有效。     

软肝饮对免疫性肝纤维化大鼠胶原代谢水平的影响

目的：建立大鼠免疫损伤性肝纤维化的实验模型,研究中药复方软肝饮对血清层粘;连蛋白(Laminin,LN)、透明质酸(Hyaluronic acid,HA)、血清Ⅲ型前胶原(Precollagen typeⅢ,PCⅢ)、肝脏羟脯氨酸(Hydroxyproline,Hyp)含量的影响,探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法：在以人血白蛋白(HSA)诱导的免疫损伤性肝纤维化大鼠模型基础上,软肝饮小剂量(1g／kg),大剂量(2g／kg)灌胃给药,连续8周,以鳖甲软肝片和秋水仙碱为阳性对照药;放射性免疫方法测定大鼠血清中HA、LN、PCⅢ含量;化学法测定肝脏羟脯氨酸含量。结果：软肝饮两个剂量组可明显降低HSA诱导免疫性肝纤维化大鼠模型血清中HA、LN、PCⅢ的含量,同时可降低大鼠肝脏中羟脯氨酸的含量。结论：软肝饮通过对肝脏胶原物质代谢的影响而产生抗肝纤维化的治疗作用。     

新藤黄酸抑制人肝癌细胞BEL-7402自噬作用研究

目的观察新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)对人肝癌细胞BEL-7402自噬的影响,为GNA抗肿瘤研究提供理论依据。方法体外培养人肝癌BEL-7402细胞株,采用MTT法检测GNA对人肝癌细胞BEL-7402存活率的影响;倒置显微镜观察给药前后细胞形态变化;单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)染色,荧光显微镜观察细胞自噬小体;透射电子显微镜进一步观察自噬小体;Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1light chain 3,LC3)和p62、Beclin1的表达水平及加入自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin,Rap)和自噬抑制剂氯喹(chloroquine,CQ)后自噬相关蛋白的表达情况。结果 GNA能显著抑制人肝癌细胞BEL-7402的增殖并呈时效及量效关系;倒置显微镜观察结果显示GNA组细胞随药物浓度增大,细胞悬浮增多,高浓度给药组细胞出现碎片化;荧光显微镜下观察结果显示,随药物浓度的增加,荧光点状聚集增多;透射电子显微镜观察发现,随GNA浓度的增加,细胞内自噬空泡数量增多,与对照组比较,加入自噬诱导剂Rap后,自噬空泡数量显著增多;Western blot法检测结果显示,随GNA浓度的增加,Beclin1、p62、LC3-Ⅱ蛋白表达水平均增加(P<0.05),LC3-Ⅰ无明显变化,表明BEL-7402细胞自噬前期被激活,后期进程被抑制。结论 GNA能抑制人肝癌细胞BEL-7402的增殖,其机制可能部分是通过抑制自噬后期自噬体与溶酶体的融合,抑制人肝癌BEL-7402细胞的保护性自噬。     

基于Hippo/AMPK/AKT信号通路探究十二味疏肝利胆颗粒防治胆固醇结石的机制

目的 探究十二味疏肝利胆颗粒（Twelve-Flavor Shugan Lidan Granule,TSLG）降低胆固醇累积预防结石生成的分子机制。方法 基于药理学数据分析获取TSLG的活性成分与靶点;从Genebass数据库获取与胆囊结石疾病相关的基因,通过Cytoscape软件构建TSLG调控网络并进行核心基因鉴定;采用GO与KEGG通路富集分析对TSLG调控网络中的核心基因及肝组织转录组差异基因进行生物功能与通路注释;利用分子对接方法模拟关键生物标志物与TSLG核心成分的对接模式。采用油酸构建胆固醇累积的细胞模型,应用Western blot法、免疫荧光法检测磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（phosphorylated AMP-activated protein kinase,p-AMPK）、肝脏X受体α（liver X receptors α,LXRα）、ATP结合盒转运蛋白（ATP-binding cassette sub-family G member,ABCG）5、ABCG8、胆固醇调节元件结合蛋白2（sterol regulatory element-binding protein 2,SREBP2）、磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated protein kinase B,p-AKT）、磷酸化叉头盒蛋白O1a（phosphorylated forkhead box O1 a,p-FOXO1A）的表达水平;Seahorse细胞能量代谢仪检测细胞线粒体耗氧率和细胞外酸化率;RT-qPCR检测三羧酸循环（tricarboxylic acid cycle,TAC）关键酶的mRNA表达水平。结果 网络药理学分析获得了41个TSLG调控疾病的相关靶点。分子生物学实验结果表明,TSLG抑制p-AMPK、LXRα、ABCG5、ABCG8、SREBP2的表达,增强p-AKT、p-FOXO1A的表达,TSLG抑制糖酵解并增强氧化磷酸化,TSLG抑制TAC循环酶活性,改善肝脏糖脂代谢,从而预防胆固醇结石的生成。结论 TSLG中主要成分可能通过靶向AMPK、AKT及Hippo信号通路调节肝脏代谢,以达到降低胆固醇累积、预防结石生成的作用。     

肝复健冲剂对大鼠肝纤维化胶原沉积的影响

目的：观察并定量检测肝复健冲剂对二乙基亚硝胺（DEN）诱导的大鼠肝纤维化的预防作用。方法：复制DEN诱导的大刀肝硬化模型，同时予肝复健冲剂进行干预，采用天狼红－苦味酸染色法及计算机图像分析技术定量检测肝复健冲剂对DEN致大鼠肝纤维化胶原沉积程度的影响。结果：随模型复制进程，大鼠肝内胶原沉积量逐渐增加，中药组大鼠肝脏炎性损害及肝硬化程度较对照组大鼠轻，肝复健冲剂明显降低肝脏胶原沉积量（P＜0．05）。结论：肝复健冲剂可减少肝脏胶原沉积，延缓DEN致大鼠肝硬化的形成。     

刮痧联合和乳汤治疗肝郁气滞型乳腺增生症临床观察

目的 观察刮痧联合疏肝行气中药治疗肝郁气滞型乳腺增生症的临床疗效。方法 将60例肝郁气滞型乳腺增生症患者随机分为对照组及观察组,每组30例,对照组患者口服和乳汤3个月,观察组患者口服和乳汤并接受刮痧治疗3个月。治疗前后分别采用超声观察乳腺的增生腺体厚度和增生肿块最大径,采用视觉模拟量表(visual analogue scale, VAS)评价乳房疼痛程度,采用焦虑自评量表(self-rating anxiety scale, SAS)和抑郁自评量表(self-rating depression scale, SDS)评价患者的焦虑、抑郁情绪。结果 与治疗前比较,治疗后两组患者乳房增生肿块最大径、增生腺体厚度显著缩小(P<0.05),乳房疼痛VAS评分和SAS、SDS评分显著降低(P<0.05),且观察组上述指标改善程度显著大于对照组(P<0.05)。观察组临床疗效明显优于对照组(P<0.05)。结论 刮痧联合和乳汤内服对肝郁气滞型乳腺增生症具有较好的疗效,并优于单纯和乳汤内服的疗效。     

The routine use of C-reactive protein in forensic investigations

In clinical medicine, C-reactive protein (CRP) is extensively used as a general marker for immune system activation, and post-mortem applicability has been established [M.Q. Fujita, B.L. Zhu, K. Ishida, L. Quan, S. Oritani, H. Maeda, Serum C-reactive protein levels in postmortem blood-an analysis with special reference to the cause of death and survival time, Forensic Sci. Int. 130 (2002) 160-166; L. Uhlin-Hansen, C-reactive protein (CRP), a comparison of pre- and post-mortem blood levels, Forensic Sci. Int. 124 (2001) 32-35]. We have analysed the routine use of CRP in non-selected cases. Scarcity of blood available for analysis is a common problem in forensic investigation, and in response to this we have developed a method using liver as a source. In 50 consecutive autopsy cases, we have evaluated method, validated results and discussed their interpretation. In three cases the analysis was not possible. For each of the remaining cases (n=47) we have analysed whole blood, serum and/or liver samples. 57% (n=25) had serum CRP > 10 mg/L. Serum levels were higher than in whole blood or liver. CRP levels in serum and whole blood samples were stable in more than one month after death, making storage for later analysis possible. Liver levels peaked at one week, but after one month putrefaction was obvious. CRP levels were independent of the post-mortem interval. The use of liver as a source has not yet been described in literature. Our results in liver samples correlate well with plasma results, and liver is a good post-mortem alternative when blood is not available. We conclude that CRP measurements are easy, viable and inexpensive in a forensic setting, and that the number of cases with CRP elevation is high in a non-selected forensic material. In cases of doubt, marked elevation of CRP is an indicator of natural mode of death, and in cases of trauma, it indicates vital reaction. It can be used as a pre-autopsy screening, leading to a more extensive search for diseases not easily diagnosed, such as sepsis or ketoacidosis.     

322例慢性乙型肝炎患者肝脏病理与病毒学指标的相关性研究

目的 研究慢性乙型肝炎患者肝脏病理与肝组织中及血清病毒标志物等因素的相关性。方法 回顾322例HBsAg阳性超过6个月并行肝穿刺活组织检查患者的临床资料，分析肝脏病理与肝组织中病毒标志物、血清HBeAg状态、血清HBV DNA水平及血清丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT）水平的相关性。结果 322例患者中，肝组织炎症分级（G）＞1且纤维化分期（S）＞1者314例，G≥3者44例，S≥3者40例。G与S呈明显正相关 (r=0.594，P<0.05)。 肝组织HBsAg、HBcAg不同表达状态患者，不同血清HBeAg状态患者，不同血清HBV DNA水平患者的肝脏炎症分级及其肝脏纤维化分期比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。不同血清ALT水平患者的肝脏炎症分级比较，差异具有统计学意义（P<0.05），血清ALT水平与肝脏炎症分级呈正相关（r=0.322，P<0.05），而与肝脏纤维化分期的相关性无统计学意义(r=0.267，P>0.05)。结论 慢性乙型肝炎患者的肝脏炎症及纤维化程度与肝组织中病毒标志物、血清HBeAg状态、血清HBV DNA水平并无明显相关性，其炎症分级与血清ALT水平呈明显正相关。     

肝纤愈对免疫性肝纤维化大鼠肝功能及组织病理学改变的影响

目的:建立大鼠免疫损伤性肝纤维化的实验模型,研究中药复方肝纤愈(GXY)对肝纤维化模型动物肝功能指标及肝组织病理学的影响。方法:在以人血白蛋白(HSA)诱导的免疫损伤性肝纤维化大鼠模型基础上,GXY小剂量(6.1g/kg)、大剂量(12.2g/kg)灌胃给药,连续8周,以鳖甲软肝片和秋水仙碱为阳性对照药。测定大鼠血清中ALT、AST、TP、Alb含量;光镜、电镜观察肝组织病理学改变。结果:GXY(大)组可明显降低HSA诱导免疫性肝纤维化大鼠模型血清中ALT、AST的含量,升高Alb的含量,同时可改善实验大鼠生存质量,且可显著改善肝组织病理学。结论:GXY具有明显的抗肝纤维化作用。