一种新发病毒病在欧洲反刍动物中的流行现状及其研究进展

施马伦贝格病是自2011年8月以来在欧洲牛、绵羊和山羊等动物中发生和流行的一种危害严重的新发病毒性传染病,已对欧洲的经济特别是养殖业造成了巨大的影响。本文从疫病发生和流行情况、病原学、流行病学和应对措施等几个方面对其进行了介绍,旨在引起我国政府和人医、兽医及其海关检疫机构的高度重视,加强相关技术的储备,做好海关、边境地区对施马伦贝格病的检疫和防范。     

牛结节性皮肤病防控技术研究现状及其策略

2019年8月我国新疆伊犁地区首次爆发牛结节性皮肤病,为做好该病的防控工作,防止外来疫情扩散蔓延到我国内地,现将该病防控的诊断检测技术、疫苗研发状况以及我国的策略进行概括介绍,为有效控制、净化和根除该病提供指导。     

传染性法氏囊病病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

为了建立传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体间接ELISA检测方法,本研究首先将VP2基因分3段(部分序列重叠),分别为VP2(1~600)、VP2(376~975)和VP2(751~1350),并根据大肠杆菌对密码子的偏爱性进行优化,将优化的3个VP2基因片段分别克隆于原核表达载体pET28a(+)中,转化E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE和Western-blot,结果3个重组VP2蛋白均获得了表达。用纯化的3个重组VP2蛋白rVP2(1~600)、rVP2(376~975)和rVP2(751~1350)分别作为包被抗原,建立了IBDV抗体间接ELISA(rVP2-ELISA)。用rVP2-ELISA、IDEXX-ELISA(IBDV)及中和试验对96份临床血清样本进行检测,结果显示,3个重组VP2蛋白建立的IBDV抗体间接ELISA检测方法、IDEXX-ELISA(IBDV)与中和试验比较,相对敏感性分别为97.1%、61.8%、58.8%和100%;相对特异性分别为85.5%、82.3%、83.9%和25.8%;符合率分别为89.6%、75.0%、75.0%和52.08%。本研究为研制IBDV抗体间接ELISA检测试剂盒(以重组VP2蛋白作为包被抗原)奠定了基础。     

BHK-21细胞蛋白样品双向凝胶电泳条件的优化

分别从BHK-21细胞处理方法、样品上样量、聚丙烯酰胺凝胶浓度和染色方法4个方面优化了BHK-21细胞蛋白双向凝胶电泳的技术条件,以为口蹄疫病毒感染细胞比较蛋白质组学研究奠定基础。结果表明,处理细胞时,采用超声破碎方法优于反复冻融方法;用考马斯亮蓝染色时,7cm胶条上样量为100μg时图谱的蛋白点较多且分离清晰;浓度为10%的聚丙烯酰胺凝胶所得的蛋白点较多;通过2种染色方法的比较,硝酸银染色方法优于考马斯亮蓝染色方法。优化后的双向凝胶电泳技术得到的图谱,蛋白点多且清晰,重复性好,拖尾现象减少,符合软件分析的要求,可用于口蹄疫病毒感染BHK-21细胞蛋白质组学研究。     

三株鸡马立克氏病病毒流行毒株基因组重复区的序列测定及分析

对国内3株马立克氏病病毒血清1型(Marek’s disease virus type 1,MDV-1)流行毒株的基因组重复区进行序列测定及分析,并与GenBank中登录的MDV-1参考毒株序列进行比较。结果显示,3株毒株的基因组重复区序列具有较高同源性,在进化上属于一独立分支。3株毒株的长重复区长度约为12kb,预测的开放阅读框(ORF)分别为43、40、43个;短重复区约为12kb,预测的ORF分别为27、25、26个。3株毒株的多个ORF中存在它们特有的共性氨基酸突变,是国内MDV-1流行毒株的特有的遗传性特征。该研究为我国MDV的流行、遗传变异及防控研究提供了材料。     

新城疫病毒La Sota疫苗株基因组全长cDNA克隆的构建及鉴定

为构建能为新城疫病毒拯救提供直接使用的全长cDNA克隆,利用分子克隆的方法,将新城疫病毒La Sota株全基因组分成末端部分重叠的11个片段(F1～F11),按其基因组顺序克隆至改造后的真核表达载体pVAXr上,同时在全长cDNA两侧引入T7启动子和丁型肝炎病毒核酶(Rib)序列,以确保病毒基因组转录产物的两端形成精确的核酸序列。鉴定结果表明,新城疫病毒La Sota株基因组全长cDNA已成功克隆至pVAXr上,命名为pVAXr-FL。本研究为新城疫病毒的拯救及外源基因的表达奠定了基础。     

Association of Five SNPs at the PARK16 locus as a Susceptibility Locus with Parkinson's Disease for Forensic Application

To investigate the association of five SNPs(rs823083,rs708723,rs4951261,rs823076 and rs16856110) at the PARK16 locus with Parkinson's disease(PD),and to potentiate its forensic application.The genomic DNAs of 215 PD patients and 212 matched controls from the northern Han Chinese population were amplified in two independent PCR systems and subsequently genotyped by digestion with the three endonucleases(Hinf Ⅰ,Nco Ⅰ and Msp Ⅰ).The genetic parameters and association studies were carried out with SPSS 13.0,Haploview version 4.2 and PLINK 1.07 softwares.We detected accurately all genotypes in the five SNPs with multiplex PCR-RFLP and mismatched multiplex PCR-RFLP techniques.The genotypes of four SNPs,except for rs823083,were in Hardy-Weinberg equilibrium.The four SNPs,rs16856110,rs4951261,rs708723 and rs823076,which were in linkage equilibrium,should not be associated with PD(P-values ranging from 0.077 to 0.544).The SNPs investigated at the PARK16 locus were not found to be involved in PD-associated blocks in the northern Han Chinese population.The allele distributions of rs708723,rs4951261,rs823076 and rs16856110 in the northern Han Chinese population can be highly polymorphic,which can be applied to genetic analysis and forensic practices.     

氢氧化铝纳米颗粒对鸡新城疫抗原的免疫佐剂效应

以新城疫病毒为抗原,制备纳米氢氧化铝和常规氢氧化铝佐剂灭活疫苗,分别免疫20日龄雏鸡,比较了免疫后2～24 d的抗体效价和外周血淋巴细胞CD4、CD8分子mRNA的表达水平。结果显示,纳米氢氧化铝佐剂组抗体效价在免疫后第10 d达到峰值,为6.67±0.58,免疫保护期超过9 d,常规氢氧化铝佐剂组抗体效价在免疫后第10 d达到峰值,为4.33±0.58,免疫保护期小于7 d;与常规氢氧化铝佐剂组相比,纳米氢氧化铝佐剂组免疫后4～17 d的CD4以及10～17 d的CD8分子mRNA的表达水平显著提高,在峰值时后者的表达量为前者的2.0和1.9倍。结果表明,纳米氢氧化铝佐剂能辅佐鸡体产生比常规氢氧化铝佐剂更强烈的体液免疫和细胞免疫。     

VEGF免疫组化染色在冠心病猝死诊断中的应用

运用免疫组化SABC法和图像分析与统计学处理系统 ,对16例冠心病猝死和15例非冠心病猝死对照组尸检心脏标本心肌局部血管内皮生长因子 (VEGF)的表达进行了研究。结果 :16例冠心病猝心脏标本心肌梗死局部心肌均有VEGF的阳性表达 ,尤以心肌梗死灶边缘为甚 ,阳性表达率为100 %。15例非冠心病猝死对照组心脏标本仅有2例心肌局部散在有VEGF弱阳性表达 ,其余为阴性。将免疫组化染色结果进行图像定量分析与统计学处理 ,冠心病猝死组阳性指数为13.68±2.73 ,对照组为2.05±0.84 ,两组结果有极显著性差异 (P<0.01)。本研究结果提示 ,VEGF免疫组化染色可望为冠心病猝死的死后诊断提供一个比较客观的病理形态学依据