堆型艾美球虫广东株3-1E基因的克隆与序列分析

根据GenBank中登录的堆型艾美球虫31E基因序列,设计了3条引物,以广东株堆型艾美球虫裂殖子总RNA为模板,利用反转录聚合酶链反应(RTPCR)扩增获得了31E基因部分片段,将这一片段克隆至pGEMTEasy载体中,经PCR、限制性内切酶分析和克隆片段的序列测定、比较,证实了克隆片段的可靠性。序列比较发现,所克隆的基因片段与Eimeriaacervulina美国株(US)、E.acervulinaQH株31EcDNA的核苷酸同源性分别为99.0%和99.2%,推导氨基酸的同源性分别为98.2%和97.6%。     

牛流行热病毒G蛋白基因RT-PCR最适条件的确立

牛流行热是一种由病毒引起的急性热性传染病。本病的特征是突然高热、呼吸迫促、消化机能障碍、全身虚弱、步态僵硬、跛行等。本病虽然致死率不高,但传播迅速,使乳牛产奶量和奶的品质下降,使耕牛役用能力降低或丧失,部分怀孕母牛流产,给养牛业造成重大的经济损失。牛...     

非洲猪瘟研究进展

非洲猪瘟（ＡｆｒｉｃａｎＳｗｉｎｅＦｅｖｅｒ，ＡＳＦ）是由ＡＳＦ病毒引起的猪的急性烈性传染病，以全身出血、呼吸障碍和神经症状为主要特征，其发病率和死亡率几乎达１００％，对养猪业危害巨大，是各国严密防范的传染病，也是世界猪病研究的重点。１流行病学ＡＳＦ...     

堆形艾美球虫广东株Ea1A基因的扩增与序列测定

根据GenBank上登录的堆形艾美球虫Ea1A基因序列 ,设计了 1对引物 ,以抽提的广东株的总RNA为模板 ,利用反转录 聚合酶链反应 (RT PCR)扩增获得了Ea1A基因部分片段 ,并将此片段克隆至pGEM T载体中 ,经PCR、限制性内切酶分析和克隆片段序列测定、比较 ,证实了克隆片段的可靠性     

几种斑点试验灵敏度比较的研究

本文对几种单克隆抗体参与的斑点试验在检测牛外周血淋巴细胞表面抗原的灵敏度进行了比较,其结果:免疫金/银染色>放射自显影>免疫酶染色>免疫金染色的灵敏度。     

牛外周血T、B和单核细胞的分离、鉴定及扫描电镜观察

将等密度离心技术、纤维结合素粘附技术和免疫亲和粘附技术相结合,建立了牛T、B和单核细胞的分离方法。制备了兔抗牛Ig和鼠抗牛胸腺细胞血清,并对上述3种细胞作了直接和间接免疫荧光试验及非特异性酯酶染色检查。还利用扫描电镜技术对这3种细胞作了形态学观察。结果表明,所制备的牛T、B和单核细胞的纯度分别达95％、93％和89％,并证明T细胞表面较光滑,B细胞表面较粗糙,单核细胞表面具有皱膜样结构。     

脂质体介导鸡新城疫病毒核酸免疫研究

用天然磷脂脂质体包裹鸡新城疫病毒血凝素神经胺酸酶(HN)基因的真核表达质粒pcHNM DNA,免疫5周龄雏鸡,1周后免疫鸡血清中的特异性HI抗体开始升高,至第6周空白对照组抗体为2.30 log2,裸DNA免疫组为4.09 log2,脂质体DNA免疫组为4.75 log2;用新城疫强毒F48E9攻击后,未免疫组鸡的存活率为27.28%,裸DNA免疫组存活率为81.82%,脂质体DNA免疫组存活率为90.00%,表明该质粒DNA被脂质体包裹后,免疫雏鸡可使其增强对新城疫强毒的抵抗力.     

禽流感重组禽痘病毒疫苗不同途径及剂量接种的免疫效力

将表达禽流感病毒 (AIV)H5HA和N1NA基因的重组禽痘病毒 (rFPV HA NA)以不同剂量分别经翅下刺种、肌肉注射、皮下注射、点眼及滴鼻途径接种于 4周龄SPF鸡。结果 ,该疫苗经翅下刺种、肌肉注射和皮下注射途径接种的SPF鸡 ,能够诱导其产生血凝抑制 (HI)抗体 ;用10 0LD50 的HPAIVA/Goose/Guangdong/ 1/ 96 (H5N1)毒株攻击后 ,免疫鸡无一发病和死亡 ,免疫保护率为 10 0 %。以点眼和滴鼻途径免疫的SPF鸡 ,大剂量接种能够诱导产生一定水平的抗体 ,攻毒后的保护率分别为 83.3%、6 6 .7% ;而小剂量接种则不产生免疫反应 ,保护率为 0。表明rFPV HA NA疫苗只有经翅下刺种、肌肉注射和皮下注射途径接种 ,才能够诱导机体产生高水平的免疫力。     

反义RNA重组逆转录病毒逆转录套式PCR检测方法的建立

为探求一种快速检测反义RNA重组逆转录病毒效价的新方法,用脂质体介导法将反义RNA重组逆转录病毒载体pLXSA、pLXSB分别转染包装细胞系PA317,经G418筛选,获得数个稳定的产毒细胞克隆,择优挑选7个细胞克隆扩增培养,收集细胞上清,用异硫氰酸胍-酚一步法提取病毒RNA,进行逆转录套式PCR,检测细胞上清中的反义RNA重组逆转录病毒效价,同时用传统方法(小鼠成纤维放大法)进行测定。2种方法检测结果的比较表明,逆转录套式PCR法的特异性和敏感性均高于小鼠成纤维放大法,是一种敏感性高、特异性强、操作简便、快速的检测逆转录病毒效价的新方法。     

阳离子脂质体的制备及其与禽流感病毒HA基因作用的研究

用超声波法制备了ＤＣｃｈｏｌ阳离子脂质体,研究了阳离子脂质体与禽流感病毒（ＡＩＶ）保护性抗原血凝素（ＨＡ）基因重组质粒ｐＳＶＨ７复合物的特性。电子显微镜观察表明,阳离子脂质体与ｐＳＶＨ７形成复合物后,脂质体发生聚集、膜融合,脂质体直径变大,并出现了多层结构脂质体;通过检测脂质体在２４８ｎｍ处的吸光度变化,研究了脂质体与ｐＳＶＨ７质粒复合物形成及膜融合的动力学过程,脂质体ＤＮＡ复合物是在最初１～１５ｍｉｎ内形成的,其主要作用是静电吸引力,ＮａＣｌ和ＳＤＳ也能引起阳离子脂质体的融合。