不同日龄鸡的原代肝细胞分离与鉴定

选取不同日龄肉鸡,通过剪碎法和半原位灌流法分别分离1、15、30日龄肉鸡和成年肉鸡原代肝细胞并进行培养。采用油红O染色检测脂滴存在情况,PAS染色检测糖原分泌情况,免疫组织化学法和间接免疫荧光染色法检测肝细胞特异标记物CK18。结果显示,1日龄的鸡原代肝细胞内脂滴过多,15日龄的鸡原代肝细胞状态欠佳,30日龄和成年的鸡原代肝细胞生长状态和形态良好;原代肝细胞内存在大量的脂滴和糖原,免疫组织化学法和间接免疫荧光染色显示分离的细胞为CK18阳性细胞,即为肝细胞。结果表明,30日龄和成年肉鸡采用半原位灌流法分离得到的细胞纯度高、数量多且状态良好,且分离的肝细胞具备分泌糖原和储存脂质的功能,适合进行体外试验研究。