乳鼠成骨细胞的培养及鉴定

无菌采取5日龄SD大鼠的颅盖骨,用胰蛋白酶预消化后,漂洗,剪碎,再用Ⅱ型胶原酶消化获得成骨细胞。通过倒置相差显微镜观察,并用碱性磷酸酶和矿化结节染色鉴定,利用微量滴定(MTT)法测定一个培养周期的成骨细胞活性分布,探讨一种经济、高效的原代成骨细胞培养方法。倒置相差显微镜形态观察结果显示,未贴壁的细胞呈圆形,贴壁生长的细胞呈不规则梭形、三角形或多角形,单核,有1~3个核仁;碱性磷酸酶和钙化结节染色均呈阳性(阳性率≥98.06%);MTT法结合形态学观察结果显示,成骨细胞培养至第10 d时活性最强。证实用改良的二次酶消化法能够在短时间内获得大量成骨细胞,且所培养的细胞具有典型的成骨细胞形态和功能。     

磷对体外大鼠成骨细胞增殖分化及钙化功能的影响

在体外培养大鼠成骨细胞的过程中添加磷(0、1、2、4 mmol/L),检测不同时间内的细胞增殖能力、碱性磷酸酶活性、骨桥蛋白表达及钙化功能,探讨了磷对成骨细胞增殖分化及钙化的影响。结果表明,磷能促进成骨细胞增殖,随着磷浓度的增加,增殖作用减弱,只在添加磷后第6、7 d极显著高于对照组;磷能显著或极显著地抑制碱性磷酸酶活性,即作用第5 d时,4 mmol/L磷组显著低于1 mmol/L磷组;作用第8 d时,4 mmol/L磷组显著低于1 mmol/L磷组,2 mmol/L磷组极显著低于4 mmol/L磷组;磷能诱导骨桥蛋白的表达(P<0.01),12、mmol/L高于4 mmol/L磷组;磷能诱导钙化,钙化结节个数极显著高于对照组,钙化结节平均面积只有1 mmol/L磷组显著高于对照组,随着磷浓度的变大,钙化结节平均面积逐渐减小而钙化结节个数则逐渐增多。表明添加不同浓度的磷均能抑制成骨细胞的早期分化,促进其增殖,诱导细胞基质成熟及钙化,利于新骨的形成,但4 mmol/L磷组效果较差。