牛支原体MBOVPG45＿0212的原核表达及其免疫原性分析

为探究牛支原体MBOVPG45＿0212蛋白的免疫学功能,以牛支原体基因组DNA为模板,PCR扩增MBOVPG45＿0212基因并测序分析;经基因密码子优化后构建重组质粒pET-30a-0212,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,用Ni-NTA纯化目的蛋白,Western-blot验证纯化的重组蛋白与牛支原体不同血清的反应情况;将纯化蛋白免疫小鼠后制备多克隆抗体,Western-blot测定多克隆抗体是否识别牛支原体天然蛋白。PCR结果显示,MBOVPG45＿0212基因全长约1 014 bp;pET-30a-0212重组质粒在大肠杆菌中于16℃经0.02 mmol/L IPTG诱导12 h能成功表达大小约43 ku的目的蛋白;纯化蛋白与牛支原体感染血清、免疫血清均能产生特异性反应,免疫小鼠血清效价达到1∶51 200以上,显示重组MBOVPG45＿0212蛋白具有良好的免疫原性和反应活性。获得纯化重组MBOVPG45＿0212蛋白,并制备其高效价的多克隆抗体,为其后续生物学功能研究奠定了基础。