猪瘟野毒株与疫苗株双重TapMan实时定量PCR方法的建立与应用

为实现对猪瘟野毒株与疫苗株之间的快速鉴别,本试验建立了 一种猪瘟野毒株与疫苗株的双重TapMan实时定量PCR的检测方法.通过对GenBank公布的猪瘟病毒野毒株及疫苗株的全基因组序列进行比对和分析,设计出2对特异性引物及2条TapMan探针,经反应体系及反应条件优化后,对其特异性、稳定性及敏感性进行了验证.结果显示,...     

霍乱弧菌二核苷酸环化酶的可溶性原核表达及其表达产物的生物活性分析

为获得具有生物活性的霍乱弧菌二核苷酸环化酶(DncV)蛋白与环二核苷酸c-di-GMP、c-di-AMP和3'3'-cGAMP,构建了 DncV基因的原核表达载体pET-28a-SUMO-DncV,将其转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),并通过优化诱导条件实现了可溶性表达;利用镍柱亲和层析纯化表达的重组蛋白产物,随...     

牛结节性皮肤病防控技术研究现状及其策略

2019年8月我国新疆伊犁地区首次爆发牛结节性皮肤病,为做好该病的防控工作,防止外来疫情扩散蔓延到我国内地,现将该病防控的诊断检测技术、疫苗研发状况以及我国的策略进行概括介绍,为有效控制、净化和根除该病提供指导。     

山羊痘病毒L1R蛋白的原核表达及其免疫原性的研究

为探究山羊痘病毒L1R蛋白的免疫原性,将山羊痘病毒的L1R基因克隆到p ET-30a(+)原核表达载体并转化大肠杆菌BL21(DE3),挑取阳性克隆进行诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析后进行纯化,将纯化的重组L1R蛋白免疫BALB/c小鼠,通过间接ELISA、淋巴细胞增殖和微量中和试验研究重组L1R蛋白的免疫原性及其多克隆抗体的抗病毒作用。结果显示,成功表达出分子质量约为26 ku的目的蛋白,其可被山羊抗绵羊痘阳性血清所特异性识别。重组L1R蛋白能够刺激小鼠产生体液免疫和细胞免疫,并且其多克隆抗体能够中和山羊痘病毒,从而证实山羊痘病毒L1R蛋白具有良好的免疫原性。     

牦牛IFN-γ基因的表达及其产物的生物学活性分析

用植物血凝素和脂多糖诱导牦牛外周血淋巴细胞,提取细胞总RNA,利用RT-PCR技术克隆了牦牛IFN-γ(YakIFN-γ)基因,然后设计了1对表达引物,从pGEM-YakIFN-γ载体上扩增YakIFN-γ成熟蛋白基因,将牦牛IFN-γ基因与表达载体pET-30a连接,构建了重组表达质粒pET-30-YakIFN-γ。用IPTG诱导表达的可溶性表达产物经镍柱亲和纯化,用纯化的重组YakIFN-γ蛋白进行了MTT、抑制肿瘤细胞增殖和细胞病变抑制的生物学特性研究。结果显示,成功克隆和表达了YakIFN-γ基因;序列分析表明:克隆的YakIFN-γ基因序列与GenBank上登录的黄牛IFN-γ基因序列的同源性为99.0%。SDS-PAGE分析和Western-blot检测证实,获得了高纯度的重组YakIFN-γ蛋白。重组YakIFN-γ(rYakIFN-γ)对伪狂犬病病毒的活性单位为2.2×103U/mg。表明表达并纯化的rYakIFN-γ蛋白具有较高的生物学活性和干扰病毒复制的活性。     

猪瘟病毒GSLZ株的分离与鉴定

采集甘肃省兰州市某猪场疑似猪瘟样品,将RT-PCR检测为阳性的样品处理后接种PK-15细胞并盲传至第12代,结果在盲传2代之后的细胞培养物中均可检测到猪瘟病毒(CSFV)E2基因.经浓缩、纯化的病毒在电镜下呈约25 nm典型的CSFV病毒粒子,将其命名为GSLZ株.对E2基因核苷酸序列的分析显示,该分离株与标准参考毒株...     

猪T细胞受体β链CDR3的多样性及其分子结构的遗传特征

通过带谱分型技术研究临床健康猪T细胞受体(TCR)β链CDR3的谱型种类及多样性,并对其序列进行生物信息学分析,以探究CDR3分子结构的遗传特征。结果显示,20个TRBV家族在3头猪中均有表达,且大部分TRBV家族CDR3的谱型呈现类高斯分布,具有丰富的多样性;同一个体中不同TRBV家族CDR3出现的频次相差较大,同一TRBV家族在不同个体中出现的频次也不相同;100多条猪TCRβ链基因序列的CDR3分析发现,其大小在33~66nt之间,出现频次最多的序列为第42位碱基;在CDR3核苷酸序列组成中,鸟嘌呤的含量较高,推测其编码甘氨酸的频次较高;TCRβ链CDR3的两侧由相对保守的氨基酸组成,中间部分氨基酸变化较大,其中在第5位和第8位的氨基酸组成差异最大,确认CDR3的多样性和复杂性主要由D区两端的N插入序列及拼接时的灵活性造成。本研究结果为T细胞TCR分子的功能复杂性与特异性研究提供了一定的理论依据。     

Toll样受体7介导的抗病毒天然免疫反应研究进展

概述了Toll样受体(TLRs)的发现、种类及其作用模式,重点介绍了TLR7的分子结构、组织分布、识别的配体以及依赖MyD88接头分子的信号转导通路,最后,综述了TLR7介导的抗病毒效应的研究进展。提出,对TLR7及其作用机制的研究必将有助于新型动物用疫苗的创制。     

合作猪TLR3及其剪接体的基因克隆与序列分析

为了研究猪Toll样受体3(pTLR3)基因的选择性剪切机制,应用反转录-聚合酶链反应扩增技术,从猪外周血淋巴细胞中克隆了pTLR3及其剪接体基因(pTLR3a,pTLR3b)。pTLR3基因序列分析表明,克隆的基因ORF为2 718bp,编码905个氨基酸;推导的氨基酸序列分析显示,在其胞外区具有LRRs结构域,胞内区含有TIR结构域,具有TLR家族的典型结构特征。剪接体分析显示,pTLR3a和pTLR3b基因缺失第3外显子,都没有可编码跨膜区、胞内区的部分。相似性分析显示,与牛、马、猫和人的相似性较高,与家兔、鼠的相似性次之。证实pTLR3可变剪接体的存在为进一步研究其功能奠定了基础。