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为建立鸡细胞因子SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank中三种重要的鸡细胞因子即ChIL-12、ChIL-15、ChIL-18的基因序列,以鸡3-磷酸甘油脱氢酶(ChGAPDH)基因为内参,设计特异引物扩增目的基因。将四种基因克隆至pMD18-T载体上,得到各自阳性克隆质粒,以四种阳性质粒为标准品建立标准曲线并进行熔解曲线分析以及灵敏性、特异性和重复性试验。结果显示,当标准品稀释度为1×102~1×1010 copies/μL时,四种基因的Ct值与浓度间具有良好的线性关系,相关系数均大于0.985。熔解曲线分析表明,产物为特异性单峰且重复性较好。应用建立的方法对堆型艾美耳球虫核酸疫苗pcDNA-Ea3-1E免疫的SPF雏鸡脾中ChIL-12mRNA和ChIL-18 mRNA的相对表达量进行检测,免疫组ChIL-12mRNA和ChIL-18mRNA的相对表达量均极显著高于空白对照组(P<0.01)。研究结果为ChIL-12、ChIL-15、ChIL-18的定量分析提供了技术平台。 相似文献
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鸡堆形艾美球虫3-1E基因真核表达质粒的构建及其抗球虫免疫保护作用 总被引:4,自引:2,他引:2
应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从堆形艾美球虫SH株子孢子中扩增3-1E基因片段,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)-3-1E.质粒纯化后体外转染293T细胞,通过间接免疫荧光技术和免疫组织化学技术检测3-1E蛋白在转染细胞中的表达情况.将构建的重组质粒以及空载体质粒分别于14、21日龄分2次经腿部肌肉注射免疫SPF雏鸡,28日龄除非免疫非感染对照组外各组攻击性感染5×104个堆形艾美球虫孢子化卵囊,观察真核表达质粒对球虫感染鸡的免疫保护作用并探讨其免疫保护机理.结果显示,与载体对照组相比,质粒pcDNA3.1(+)-3-1E 2次免疫后可显著提高脾CD8 T淋巴细胞亚型数量,并具有一定的抗球虫免疫保护作用,可显著减少每克粪便的卵囊排出量,降低十二指肠病变记分,减少增重下降等. 相似文献
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加盟被骗
张英(化名)怎么也没想到,自己第一次做生意就被骗了.
张英是吉林省吉林市的一位普通家庭妇女,因无业在家,一心想做点生意贴补家用.她是在电视里知道北京精英科技公司(化名,以下简称精英公司)的,这是一家从事加盟连锁业务的公司,其在广告中大肆宣传自己经销的"精英"品牌拥有者美国精英国际企业集团已经经过几十年国际市场的探索与发展,已经成为世界三大玻璃功能膜核心制造厂商,其"精英"系列玻璃功能膜年产量及销量占据着全球玻璃贴膜年总产量42%的份额,产品行销美洲、欧洲、亚洲等数十个发达国家,"精英"系列玻璃膜堪称目前世界上工艺最先进、科技含量最高的产品.凡是加盟精英公司的加盟商每年纯利润都在十万元以上,等等. 相似文献
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