结核分枝杆菌毒力相关因子的研究进展

结核病是威胁全球人类健康的重要人畜共患病。它的病原是结核分枝杆菌。由于结核病在治疗过程中发生了严重的耐药,对现有的抗结核药物提出了严峻的挑战。而结核分枝杆菌具有致病性是需要依赖多种基因的调控与表达,结核分枝杆菌的毒力相关因子在结核分枝杆菌的致病性上具有重要作用。结核分枝杆菌中主要与毒力相关的因子有早期分泌的一些蛋白、肽聚糖、分枝菌酸、细胞代谢相关因子和转录调节因子等。现在已经有越来越多的研究者对结核分枝杆菌的毒力因子感兴趣并对其进行了研究,期望从这些毒力因子中寻找新的药物靶标。     

鹿结核病流行株融合基因Rv3872-Rv3874-Rv3875的原核表达

以本实验室保存的鹿体内分离并鉴定的结核病流行株为模板,利用重叠延伸剪接技术设计融合基因的引物,扩增融合基因Rv3872-Rv3874-Rv3875,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Rv3872-Rv3874-Rv3875;重组表达质粒被转化入大肠杆菌BL21(DE3)后,IPTG诱导表达,并采用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析方法对目的蛋白进行纯化。基因测序结果显示,融合基因Rv3872-Rv3874-Rv3875的序列与GenBank中序列的符合率为99.89%。SDS-PAGE分析显示,融合基因在大肠杆菌中成功被诱导表达,获得以可溶形式表达的融合蛋白,该蛋白的分子质量约为60ku。Western-blot鉴定结果显示,纯化好的融合蛋白能与鹿结核病的阳性血清发生反应,说明该融合蛋白具有良好的反应原性,这一结果为它在鹿结核病血清学诊断中的应用奠定了试验基础。