鸡毒支原体丙酮酸脱氢酶E1β亚基单克隆抗体的制备和鉴定

为制备鸡毒支原体丙酮酸脱氢酶E1β亚基(PDHB)的单克隆抗体,将鸡毒支原体Rlow株的pdhb基因进行克隆和原核表达。表达产物纯化后作为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经过克隆和筛选,获得3株能稳定分泌抗鸡毒支原体PDHB抗体的杂交瘤细胞株,分别被命名为2D11、3B5和4D9。ELISA检测结果表明,3株杂交瘤细胞培养上清的抗体效价为1∶1 024~1∶2 048,小鼠腹水的抗体效价为1∶12 800~1∶25 600。单克隆抗体特异性试验显示,获得的腹水单克隆抗体均能与鸡毒支原体各菌株发生反应,而不与其他禽类病原发生反应。3株单克隆抗体的抗体亚型均为IgG1,轻链均为κ链。稳定性鉴定结果表明,获得的3株杂交瘤细胞均能稳定分泌单克隆抗体。鸡毒支原体PDHB单克隆抗体的成功制备,为研究丙酮酸脱氢酶的生物学功能和进一步建立检测方法奠定了基础。     

鸡毒支原体醛缩酶的原核表达及膜定位鉴定

为了探明醛缩酶在支原体中的定位,根据已发表的鸡毒支原体醛缩酶(fba)基因序列设计特异性的引物,以鸡毒支原体Rlow株基因组为模板,通过Overlap PCR点突变扩增鸡毒支原体醛缩酶fba基因,将fba克隆至pET-28a(+)载体后进行序列测定和分析。结果表明,fba基因全长873bp,编码290个氨基酸。将构建的重组表达质粒pET28a-fba转化至大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下成功获得表达融合蛋白rMGfba,大小约为33ku。纯化蛋白并对蛋白进行酶活性检测,结果显示该酶在体外具有与阳性对照醛缩酶相同的催化功能。用该蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,提取鸡毒支原体膜蛋白,Western-blot分析结果显示FBA多抗可与疏水性膜蛋白特异性结合,说明FBA位于鸡毒支原体膜表面。     

打造一支会干事 能干事 干成事的干部队伍

近年来,山东省临朐县司法局以打造一支"会干事、能干事、干成事"的队伍为目标,结合实际,狠抓司法所队伍建设。"发扬传统、坚定信念、执法为民"主题教育实践活动开展后,司法局更是以活动为平台,教育培训、争先创优、竞争上岗等工     

新城疫病毒诱导原代鸡胚成纤维细胞自噬的研究

为掌握新城疫病毒(NDV)在原代鸡胚成纤维细胞(CEF)上诱导细胞自噬的特性,用NDV感染CEF后,以电镜观察自噬体形成、GFP-LC3荧光迁移以及Western-blot检测LC3-Ⅰ/Ⅱ转化判定自噬。p62降解和GFP-LC3向溶酶体的转移判定自噬流。结果显示,在感染后第12~24小时能在细胞中发现大量双层或单层膜结构;转染的GFP-LC3质粒在病毒感染后呈现显著的点状分布,尤其在NDV感染形成的合胞体中明显;且病毒感染后期发生明显的LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化。NDV感染能够诱导p62蛋白的降解,共聚焦结果显示,GFP-LC3在病毒感染中后期发生向溶酶体的转移,说明NDV感染能够诱导完整自噬流的产生。结果表明,NDV感染CEF后能够强烈诱导细胞自噬发生,这为进一步研究新城疫病毒和禽源细胞互作奠定了基础。     

乙型脑炎病毒E蛋白基因的原核表达及ELISA抗体检测方法的建立

通过PCR方法扩增流行性乙型脑炎病毒(JEV)E基因,全长1 500 bp,将其连入经双酶切的pET-28a(+)载体,构建了重组原核表达质粒pET28a-E.将pET28a-E转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导,进行SDS-PAGE分析.结果显示,E基因在大肠杆菌BL21中获得高效表达,表达的蛋白分子质量约53 ku.Western-blot分析表明,该表达产物具有良好的抗原性.在此基础上,利用该蛋白初步建立了检测猪JEV抗体的间接ELISA方法,并用武汉科前生物制品公司生产的猪JEV ELISA抗体检测试剂盒同时对250份临床采集的猪血清样品进行了检测,结果这两种方法的符合率达到92%,表明建立的ELISA方法具有较高的灵敏性和特异性.     

ClassⅠ新城疫病毒Duck/JS/10弱毒株NP重组蛋白的表达及广谱性NDV单克隆抗体的制备

为了制备针对ClassⅠ新城疫病毒Duck/JS/10弱毒株NP蛋白的单克隆抗体,采用RT-PCR方法从ClassⅠ新城疫病毒Duck/JS/10弱毒株中扩增出NP基因,并定向克隆至pET-32a-c(+)原核表达载体中,经酶切鉴定及测序验证后转化BL21(DE3)进行原核表达,用纯化得到的NP重组蛋白免疫6周龄BALB/c小鼠。结果显示,成功表达出分子质量约为71ku的NP重组融合蛋白,SDS-PAGE结果显示,表达的蛋白以可溶性形式存在于菌体中。用间接ELISA方法成功筛选出2株针对ClassⅠ新城疫病毒Duck/JS/10弱毒株NP蛋白的单克隆抗体,该抗体具有良好的ELISA、IFA以及Western-blot效价。免疫特异性鉴定结果表明,获得的2株单克隆抗体具有良好的通用性,无论是ClassⅠ毒株还是两种不同基因组长度的ClassⅡ毒株,均能与其发生特异反应。     

基子因子分析的上市银行经营绩效评价

因子分析方法是多元统计的重要方法，可以较大限度地避免人为因素所产生的偏差，在实际中得到广泛的应用。应用因子分析法对我国商业银行的绩效评价具有很大的现实意义，对八家上市银行因子分析的基础上，按照总得分的高低得出八家银行的排名，并为提高我国商业银行经营绩效提出对策建议：精简规模，改善盈利结构，完善公司治理机制。     

广州市建立社会工作队伍的必要性与可行性研究

广州市不仅具有对社会工作专业的强大需求,而且具有建立社工专业队伍的独特优势。建立社工队伍的必要性体现在:存在外来人口问题,贫困问题,残疾问题,这些社会问题的解决需要社工的介入。可行性表现在:能够借鉴香港、台湾及内地省份的先进经验;本地非政府组织、义工组织已有初步发展,社工教育、社工协会的发展,专业职业考试的推进以及政府及社会支持力度的提升等。必要性和可行性的存在,为广州市社会工作队伍发展提供了广阔的空间。     

不忘初心,助力美丽乡村梦——我省“建管护营”并举建设“四好农村路”

正党的十八大以来,我省以建设"四好农村路"为着力点,全面推进农村公路建管养运协调发展,不断提升农村公路的质量效益和服务水平,为全面建成小康社会当好先行官,真正把农村公路建设成为人民群众的德政路、民生路、富裕路,用农村公路的"杠杆",助推乡村经济振兴,实现农民群众的美丽乡村梦。先导先行,扎实建好农村公路。实施重点攻坚,为群众出村进城上高速提供便利。抓住两个重点:一是环京津地区。落实京津冀     

中国社会工作专业教育现状初探

通过对国内73所高校社会工作专业教育现状进行调查,笔者得出下列结论:该专业独立性不强,招生层次不高,学生就业与社会工作相关程度不高;师资队伍以中青年教师为主,专业化程度不高;专业课程设置较为规范,部分高校向特色化方向发展;专业教材评价较好,但仍需在本土化和实践性方面加以改进;多数高校尚未建立专业实验室,已建成的实验室使用效果较好;高校普遍重视社会实习,已有实习情况良好。