胸膜肺炎放线杆菌apx I A基因在不同宿主系统中的表达及密码子偏好性分析

用PCR方法从胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清1型参考株APP259的基因组DNA中,扩增了约954 bp的apx I A基因片段,分别构建了大肠杆菌表达栽体pGEX-4T-1/apx I A和毕赤酵母表达载体pPICZαA/apx I A.对目的基因密码子偏好性进行了分析,发现其中有4个大肠杆菌稀有密码子,占1.2%;有49个毕赤酵母稀有密码子,占15.4%.利用所构建的大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1/apx I A和毕赤酵母表达载体pPICZαA/apx I A分别进行表达.结果显示,目的基因在大肠杆菌中能以包涵体形式进行高效表达,其融合蛋白占菌体总蛋白的32%;在毕赤酵母中则以较低水平分泌表达至培养基的上清液中,40倍浓缩后方能检测到少量目的蛋白.证实,目的基因序列中的密码子偏好性影响其在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达.     

买一件“生物学”的奢侈品

还是上世纪的事了。在改成"医学系"的志愿前,我填的是"生物系"。即便日后考上了医学院,我的医预科仍然是和生物系的学生一起度过的。在北大校园里的英语角、同乡会、文学社里,要是有人问起你是哪个系的,"生物系",—声嘎巴脆的回答,多半能激起一簇艳羡的眼光和啧啧的响声。多半是因为老师和报纸都这么告诉我们:21世纪是什     

隐私这点事儿

按照基因学理论．这世上的人多半都能扯一L关系。美洲人来自亚洲，欧洲的门人与非洲的黑人竟是近亲，而太平洋小岛上的土著人与南美的印第安人基因序列高度一致……有人研究莎士比亚，单是其与伊丽莎自女王是否有血缘关系这事儿就吵吵了几百年。其实这与我们说曹雪芹与雍正乃情敌，曹雪芹蓄谋毒杀了雍正一样，都是先大胆揣测，再小心求证。而在这“小心求证”中，往往是头绪越证越多，隐私越挖越深，所谓“剪不断，理还乱”。     

旋毛虫丝氨酸蛋白酶基因的克隆与分析

以旋毛虫感染猪血清为抗体探针,对旋毛虫3日龄成虫cDNA文库进行免疫筛选,将获得的阳性克隆进行测序,用分子生物学软件对所得cDNA序列进行了分析.序列分析结果显示,阳性克隆Zh68 cDNA全长为1 372 bp,含有1个1 287 bp的完整的开放阅读框架,编码由429个氨基酸组成的多肽,理论分子质量为47.5 ku,等电点为8.45.SMART分析表明,1～18位氨基酸为信号肽序列,37～277位氨基酸为典型的丝氨酸蛋白酶胰蛋白酶类结构域,其中His88、Asp142、Ser233为催化中心的3个主要氨基酸残基,78～80位氨基酸为N-糖基化位点(NCS),另外还有6个保守的Cys形成二硫键.BLASTn同源性分析表明,与其他生物丝氨酸蛋白酶的基因序列无明显的同源性,为1个新的cDNA分子.BLASTp蛋白质同源性分析表明,与丝氨酸蛋白酶的同源性为30%左右.Southern-blot杂交表明,此基因在旋毛虫基因组中属于多基因家族,具有基因多态性.cDNA的PCR结果表明,此基因在旋毛虫肌幼虫、新生幼虫及成虫期均有表达.     

口蹄疫病毒P12A*3C基因转化饲草玉米高效表达载体的构建

为了研究饲草玉米可饲口蹄疫疫苗,将O型口蹄疫病毒的VP1和2A基因序列按照玉米的偏爱性密码子优化后,再与P1的其他基因及3C基因连接.同时,通过使用高效的Ubiquitin启动子以及在P1的起始密码子处添加Kozak序列和在3C基因3'末端添加内质网引导肽序列等措施提高免疫原基因的表达.结果显示,高效植物表达载体pC1300P12A*3C构建正确,可以用于后续的饲草玉米可饲口蹄疫疫苗的研究.     

已表达序列标志的专利问题

在过去的二十年里,生物技术的迅猛发展导致了大量适用于医学诊断、医药工业、农业技术、环境及食品科学的方法与产品的涌现。近十年来,又以惊人地速度发展了研究与开发基因组和生物信息学这样的新领域。旨在分析人类基因组材料并提供完整人类基因数据库的国际合作项目目前已基本完成,并已收集了包括基因序列和其调节区,以及已表达序列标记(EST)和单一核苷酸多态性(SNP)等基因组标记在内的大量。DNA信息。然而,我们也必须看到,参与人类基因组计划的有关国家于2000年6月宣布已完成了“工作框架作图”,虽然其意义十分重大,但实际上这只是一项初步的工作。真正弄清染色体上所有的基因和由之编码的蛋白质及其功能(活性),特别是找到并清楚地了解大量与疾病相关的基因,科学家们仍面临着十分艰巨的任务,并且还有很长的路要走。     

基因序列专利保护范围的界定——瑞士专利法修正案对中国的启示

基因序列专利保护范围如何设定是当前生物科技专利领域的争论焦点之一。专利保护范围决定着专利垄断权的实际价值。瑞士新近修改专利法,对基因序列保护增设限制条款。作为欧洲生物技术产业实力最强的国家之一,瑞士此举显得颇不寻常。为什么基因保护倍受瞩目?基因序列与其它专利保护客体本质差异何在?为什么瑞士对此加以限制?其立法考量如何?其理论及实证根基何在?对中国未来立法取向又有何启示?本文从法律、经济学与技术视角进行了初步探讨。     

食蟹猴和猕猴朊蛋白基因的克隆与序列分析

以外周血液的基因组DNA为模板,运用PCR方法扩增了食蟹猴和猕猴的朊蛋白基因,并将其克隆到pGEM-T Easy载体中进行测序,运用分子生物学软件对这些序列进行了分析.结果表明,所克隆的食蟹猴和猕猴朊蛋白基因的开放阅读框片段包含了朊蛋白基因的完整编码区,含有762个核苷酸,该基因内无内含子,编码253个氨基酸的前体蛋白,推测其分子质量约27.6 ku.与已报道的其他多种动物朊蛋白基因序列做比较,发现其与多种哺乳动物都有较高的同源性,其中与人的同源性最高.氨基酸点突变分析除发现了已报道的多态性位点N97S、H100N外,在食蟹猴和猕猴均发现了未报道的S242L点突变位点.此外,在食蟹猴还发现了I8M、C151R点突变位点.     

鸡抗病毒Mx基因的克隆与序列分析

用干扰素诱导剂poly(I)/(C)诱导鸡胚成纤维细胞,提取细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增了北京白鸡Mx基因全长编码区序列.序列分析表明该基因编码区长2118 bp,编码705个氨基酸残基,其第631位为天冬酰胺,理论上推测具有抗病毒活性.通过与GenBank中已登录的7个品系鸡Mx基因进行核苷酸系统进化树分析,结果显示,北京白鸡Mx基因与WL-N品系鸡Mx基因的亲缘关系最近.北京白鸡Mx基因序列与其他动物Mx基因序列的比较结果显示,核苷酸同源性为49.5%～76.8%,氨基酸同源性为44.1%～61.6%.据此可以推断克隆的Mx基因具有抗病毒活性的分子特征和特征性功能结构,不同种属动物Mx基因的同源性与其亲缘关系呈正相关.