牛D型产气荚膜梭菌肠毒血症间接ELISA诊断方法的建立

根据菌体蛋白可以刺激机体产生相应抗体的原理,建立了以产气荚膜梭菌粗提菌体蛋白为抗原的检测牛D型产气荚膜梭菌抗体的间接ELISA.结果显示,D型产气荚膜梭菌菌体裂解抗原最适包被浓度为50 μg/mL,最适包被条件为37 ℃ 1 h;被检血清的最适稀释度为1∶100,酶标二抗的最适工作浓度为1∶1 000,血清与酶标二抗的反应时间均为37 ℃ 1 h;最适封闭时间为37 ℃ 1 h;PBST稀释液中脱脂乳的浓度为30 g/L;底物最适反应条件为室温25 min;阴阳性临界值为0.032.对采集于吉林省延边州的100份牛血清样品采用建立的间接ELISA进行了检测;结果,阳性率为11.0%.经特异性试验、重复性试验和与琼脂扩散抗体检测法比较,采用裂解菌体蛋白为抗原建立的ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性.     

产气荚膜梭菌α-毒素的提取与鉴定

通过饱和硫酸铵盐析与SephadexG 2 0 0层析纯化 ,从A型产气荚膜梭菌分离菌株的培养物中获得了较纯的α毒素 ,对毒素的生物学特性鉴定结果表明 :该毒素对小白鼠的致死活性为 6 2 40 0 2MLD ,分子质量为 432 45 0 2u ,等电点为5 .3和 5 .5 ,可溶解绵羊红细胞 ,水解卵黄卵磷脂 ,且这种溶血活性与卵磷脂酶活性能被A型产气荚膜梭菌定型血清特异地抑制。     

鲜猪肉中A型产气荚膜梭菌污染情况调查

对贵阳市部分市场销售的鲜猪肉A型产气荚膜梭菌的污染情况进行了调查 ,从被检肉样中分离获得 3株A型产气荚膜梭菌 ,分离率为 6.2 5 % (3 /4 8)。表明贵阳市部分市场销售的鲜猪肉存在A型产气荚膜梭菌的污染 ,对消费者的健康构成潜在的威胁     

产气荚膜梭菌感染猝死并尸体迅速腐败1例

产气荚膜梭菌感染猝死并尸体迅速腐败１例顾晓生，薛义旗，王宝泉（１．南京医科大学法医学教研室；南京２１００２９２．南京市人民检察院技术处；南京２１０００２）ＳＰＥＥＤＹＣＡＤＡＶＩＣＰＵＴＲＥＦＡＣＴＩＯＮＩＮＡＤＥＡＴＨＯＦＡＣＵＴＥＨＥＭＯＲＲＨＡ...     

我科学家发现肥胖直接“元凶”阴沟肠杆菌

你还在为自己为何肥胖烦恼吗?近日,上海交大教授赵立平实验室的一项研究给"胖友"们带来福音。他们通过临床实验发现,一种叫作"阴沟肠杆菌"的肠道条件致病菌是造成肥胖的直接元凶之一。这也是国际上首次证明肠道细菌与肥胖之间具有直接因果关系。在实验中,阴沟肠杆菌在无菌     

A型产气荚膜梭菌最佳产毒时间的确定

测定了A型产气荚膜梭菌在庖肉培养基的生长曲线、培养液的pH值变化曲线以及不同培养时间提取的毒素液的蛋白质含量、溶血活性及卵磷脂酶活性。结果表明 ,A型产气荚膜梭菌在庖肉培养基培养 8h是其α 毒素的最佳产毒时间。     

牛D型产气荚膜梭菌肠毒血症dot-ELISA诊断方法的建立

以纯化的菌体蛋白为诊断抗原,建立了牛D型产气荚膜梭菌特异性抗体的斑点酶联免疫吸附试验(dot-ELISA)检测方法,确定了各组分的最适反应条件:抗原包被浓度为1.95 μg/mL,血清稀释度为1:320,二抗稀释度为1:2000,封闭液为30 mL/L脱脂乳,抗原、血清、二抗和封闭液的作用温度及时间均为37℃30 min.用该dot-ELISA检测30份牛血清,纯化抗原比粗提抗原的阳性检出率高16.7%;dot-ELISA的灵敏度是琼脂免疫扩散试验(AGID)法的43倍;用dot-ELISA法对100份牛血清样本进行检测,阳性率为59.0%;经特异性试验、重复性试验和与AGID法比较,表明用纯化抗原建立的方法具有良好的特异性、敏感性和重复性.     

蟾酥对产气肠杆菌抑制作用的方差分析和相关分析

把采自中华大蟾蜍的蟾酥用蒸馏水稀释成4、6、81、0 mg/mL共4种浓度,作为因素A,用LB液体培养基将活化的产气肠杆菌原液按1∶104和1∶105稀释,作为因素B,采用二因子(A和B)方差分析观察了蟾酥对产气肠杆菌抑菌圈直径的影响,并分析了蟾酥浓度与抑菌圈直径之间的相关关系。结果显示,蟾酥浓度与抑菌圈直径之间存在显著正相关(r=0.988~0.997);不同浓度的蟾酥溶液对产气肠杆菌均有抑制作用;且随着蟾酥浓度的升高,抑制作用加强。     

产气荚膜梭菌EF-Tu基因的原核表达及其多克隆抗体的制备

通过PCR方法扩增产气荚膜梭菌ATCC13124株EF-Tu基因,利用原核表达载体pGEX-6P-1构建重组质粒pGEX-EF,经双酶切和测序鉴定正确后转化E.coli Rosseta,进行IPTG诱导表达,表达产物纯化后免疫大白兔制备多克隆抗体,应用间接ELISA、Western-blot和间接免疫荧光方法对所得抗体进行检测。结果显示,经1.0mmol/L IPTG诱导5h后蛋白表达量最高,并且主要以包涵体的形式存在,分子质量为69ku。间接ELISA方法检测的多抗血清效价为1∶262 144。Western-blot结果证实,重组蛋白与产气荚膜梭菌ATCC13124株制备的多克隆抗体发生特异性结合,具有良好的免疫原性。Western-blot和间接免疫荧光结果表明,多抗血清能分别与pGEX-EF重组蛋白、ATCC13124菌体裂解液、pcDNA3.1-EF-Tu瞬时转染后的BHK-21细胞及ATCC13124感染的小鼠肠组织中菌体发生特异性结合反应。上述结果表明,此多克隆抗体能够应用于临床诊断。