微小牛蜱Bm91基因的克隆及在毕赤酵母中的表达

从我国半饱血微小牛蜱雌性成蜱肠道和唾液腺中提取总RNA;参照GenBank中已发表的微小牛蜱Bin91基因的核苷酸序列,设计了1对特异性引物.采用RT-PCR技术扩增Bm91基因,测序正确后将其亚克隆到巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K的EcoR I酶切位点,构建重组表达载体pPIC9K-Bm91.再次测序正确后将其用Sac Ⅰ内切酶线性化,电转化毕赤酵母GS115并经G418抗性筛选高拷贝重组菌株后用甲醇诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析,结果显示,Bm91基因获得了成功表达,诱导表达的培养上清液中表达出具有反应活性的83 ku的重组Bm91蛋白.     

猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶TsCL-1基因在毕赤酵母中的表达

采用RT-PCR方法从猪囊尾蚴总RNA中扩增出TsCL-1基因并构建了真核表达载体pPIC9K-TsCL-1,pPIC9K-TsCL-1电转化毕赤酵母GS115.采用G418抗性梯度筛选多拷贝重组菌株,经甲醇诱导表达,应用SDS-PAGE和Western-blot分析重组蛋白的表达情况.结果显示,TsCL-1与GenBank登录的TsCL的核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.8%和100%,与肝片吸虫和大片吸虫组织蛋白酶氨基酸的同源性为76.3%.TsCL-1基因在毕赤酵母中成功表达,表达产物的分子质量为42 ku左右;Western-blot分析表明,表达产物具有反应原性.     

鸡myostatin基因成熟区段DNA的克隆及其在甲醇酵母中的融合表达

根据GenBank中鸡myostatin(AF019621)成熟区段的cDNA序列设计了1对引物,利用PCR技术扩增了萧山鸡myostatin的成熟区段,构建了重组真核表达载体myostatin-pPIC9K,并在甲醇酵母中融合表达了myostatin蛋白。结果发现,萧山鸡myostatin基因存在2处碱基变异:T204→C204(编码的氨基酸没有变),C205→T205(编码的氨基酸由Pro变成Ser),从而产生了1个EspⅠ或Bpu1102Ⅰ限制性内切酶酶切位点。核苷酸序列同源性分析表明,myostatin基因成熟区段DNA在不同物种间具有高度的保守性。SDS-PAGE鉴定结果表明,表达的目的蛋白(26 ku)具有生物学活性。     

感染环形泰勒虫裂殖体的牛淋巴细胞酵母双杂交文库的构建

为研究环形泰勒虫裂殖体与牛淋巴细胞之间的相互作用,以感染了环形泰勒虫裂殖体的淋巴细胞系为材料,构建了感染环形泰勒虫裂殖体的牛淋巴细胞系的酵母双杂交cDNA文库。首先,提取纯化细胞系的mRNA,经反转录合成第一条链cDNA,通过LD-PCR合成双链cDNA。柱层析剔除250bp以下的小片段;将双链cDNA与经SmaⅠ处理过的文库质粒pGADT7-Rec一起转入到酵母Y187感受态细胞内,双链cDNA与文库质粒会发生同源重组,经过抗性筛选即可得到酵母双杂交cDNA文库。文库构建结果显示,该文库库容量达2.4×107 CFU,插入片段的平均长度在1 000bp左右,达到试剂盒建库要求。     

政治教育篇（之六）

江苏省姜堰市共有农村基层党组织1125个、党员干部21753名。近年来，市委组织部将提高广大农村党员干部发展经济、服务群众、带领农民致富的本领当作头等大事来抓，在全市农村党员干部中，深入开展了以“带头富、带领富，促进农村经济快速发展”为主要内容的“双带一促”活动．较好地发挥了村级党组织的“头雁”作用、农村干部的“示范”作用和农村党员的“酵母”作用．带来了群雁高飞的“雁阵效应”．从而加快了群众致富奔小康的步伐。全市有967％的农村干部、81．2％的农村党员领办兴办了致富项目，带动了近3万户农民走上致富路。     

鸡贫血病毒VP1、VP2和VP3基因酵母双杂交载体的构建及其自激活活性的鉴定

为构建鸡贫血病毒(CAV)VP1、VP2、VP3基因酵母双杂交载体并鉴定其自激活作用,从CAV细胞传代毒M9905毒株中提取基因组DNA,利用PCR分别扩增VP1、VP2和VP3基因,采用Gateway技术将VP1、VP2和VP3基因分别克隆到酵母双杂交载体pDEST32和pDEST22中,构建了诱饵载体及猎物载体,经酶切和PCR鉴定且测序正确后,用醋酸锂法转化酵母菌株Mav203,通过缺陷型平板SD/-Leu/-Trp/-His和SD/-Leu/-Trp/-Ura筛选以及LacZ报告基因检测载体有无自激活作用。结果表明,成功构建了诱饵载体pDEST32-VP1/VP2/VP3和捕获载体pDEST22-VP1/VP2/VP3,并证明其VP1、VP2和VP3蛋白在酵母双杂交系统中无自激活作用。研究结果为下一步利用酵母双杂交系统探索CAVVP1、VP2、VP3蛋白之间的相互作用奠定了基础。     

中药富硒酵母对闽中麻鸡肝和小肠细微结构的影响

选择1日龄闽中麻鸡396只,随机分为4组,A组饲喂玉米-豆粕型基础日粮,B组、C组、D组在基础日粮中分别添加2、3、4 g/kg的中药富硒酵母,试验为期49 d,研究了日粮中添加中药富硒酵母对闽中麻鸡肝和小肠发育的影响.于第7、21、35、49 d每组随机抽取6只鸡,采取肝和小肠各段,Bouin液固定,制作石蜡切片,光镜观察;第49 d取A组和D组的肝和空肠,25 mL/L戊二醛固定,制作超薄切片,电镜观察.结果显示,与对照组相比,试验组肝的平均质量和器官指数大多高于对照组;肝细胞线粒体增多增大,枯否氏细胞内溶酶体增多;小肠绒毛和肠腺长于A组;空肠柱状细胞的微绒毛增长.证实,基础日粮中添加中药富硒酵母能促进鸡肝和小肠的发育,改善肝细胞和小肠黏膜的细微结构.     

高尿酸血症实验模型概况

高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)是指细胞外液的尿酸盐呈超饱和状,其诊断标准为人体温37 ℃时血清中尿酸含量男性≥416 μmol/L,女性≥360 μmol/L[1].早在1999年世界卫生组织就将高尿酸血症列入代谢综合征范畴.     

发挥国有资本“醇母效应”打开“三低一小”左捆右绑

当前,海南经济已经步入健康较快发展的轨道,但是“三低一小”的主要矛盾仍然制约着经济快速发展。这些以历史原因为主要成因形成的矛盾和问题,必须通过发展来解决。发展需要资本,国有资产管理体制改革为我们获得资本、增强经济发展的物质基础、实施国有资本运作、解决当前主要矛盾提供了机遇。根据2004年底的统计数据,海南全省经营性国有资产为172亿元,从绝对数量看,位居全国的第28位。毫无疑问,依据目前省属国有资本的现状谈国有资本要对地方经济的发展起决定性的作用是不现实的。相反,因国有资本小,忽略其作用也是不对的。如果我们能够通…     

邯郸市金麦酵母有限公司磁县分公司

邯郸市金麦酵母有限公司磁县分公司（邯郸食用菌）、金麦菌业合作社成立于2007年9月，公司坐落在风景秀丽素有小江南之称的邯郸南郊——磁县万亩红荷之滨。