牛分枝杆菌esat-6和mpb70-mpb83基因DNA疫苗的免疫效果

用PCR技术和重叠延伸剪接技术获得牛分枝杆菌esat-6基因和mpb70-mpb83融合基因,连接真核表达载体pcDNA3.1(+),构建了重组质粒pCE6和pC70-83-E6。分4组免疫小鼠:pCE6组、pC70-83-E6组、pcDNA3.1(+)和PBS对照组,采用间接ELISA法检测免疫小鼠血清特异性抗体水平,MTT法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况和IFN-γ分泌情况。结果表明,2重组质粒免疫组小鼠的血清抗体水平持续上升,而2对照组始终维持在较低水平,且pC70-83-E6组小鼠的抗体水平高于pCE6组。经PPD刺激后,pCE6组和pC70-83-E6组小鼠的SI值与2对照组均差异显著(P<0.05),2重组质粒免疫组间差异不显著(P>0.05);2重组质粒免疫小鼠脾细胞产生的IFN-γ均显著高于2对照组(P<0.05),且pC70-83-E6组明显高于其他3组(P<0.05)。证实本试验构建的2种牛分枝杆菌DNA疫苗可有效诱导实验动物产生体液免疫和细胞免疫应答。     

伪结核棒状杆菌可视化LAMP现场检测方法的建立

为建立伪结核棒状杆菌可视化LAMP检测方法,根据伪结核棒状杆菌16S rRNA基因的特异性保守核苷酸序列设计2对引物,通过反应体系和反应条件的优化,建立了伪结核棒状杆菌可视化LAMP现场检测方法,并评价该方法的特异性和敏感性。结果显示,本实验所建立LAMP方法的最佳反应条件为62℃1 h。利用该方法检测大肠杆菌、肠炎沙门菌、金黄色葡萄球菌等山羊和绵羊常见的15种细菌的DNA样品,结果显示仅伪结核棒状杆菌检测为阳性,其他细菌检测为阴性。该方法对阳性质粒标准品pMD19-Cory的最低检出浓度为4.7 copies/μL。应用建立的LAMP方法和普通PCR方法对128份山羊皮下脓肿样品进行检测,结果显示LAMP方法和普通PCR方法的阳性率分别为21.1%(27/128)和20.3%(26/128),2种检测方法的总符合率为99.2%(127/128)。结果表明,本研究建立的可视化LAMP检测方法具有特异性强、敏感性高、快速的优点,为山羊和绵羊伪结核棒状杆菌感染的可视化现场快速诊断提供可行方法。     

在艾滋病病毒感染者中开展异烟肼预防性治疗:公共卫生面临的挑战及与实施相关的问题

异烟肼预防性治疗(isoniazid preventive therapy,IPT)是结核病防治规划(NTP)和艾滋病防治规划(NAP)联合行动的一项重要内容,目的是降低艾滋病病毒(HIV)感染者的结核病负担。然而,真正实施IPT的国家却很少。由于这一措施实施的失败,近期提出了称作“3个I“的口号(即实施感染控制(Infection control),预防结核病在卫生服务机构内传播;在艾滋病病毒感染者和艾滋病病人中加强结核病患者的发现IntensifiedTB case finding,和IPT。在本文中,我们首先回顾IPT的背景,然后讨论在HIV感染者中开展IPT面临的主要挑战,包括:实施IPT的责任和义务,发现结核分枝杆菌潜伏感染者,排除活动性结核病患者,预防异烟肼耐药,以及治疗时间和有效保护期。同时,我们也对几个目前尚未解决的、还在研究中的问题给予高度重视。最后,我们对现场如何推广IPT提出了可操作性的建议,包括:将IPT整合在艾滋病的一系列治疗关怀服务包中,遵照哲学上“边做边学“的原理开展实施性研究,制定入选IPT的流程图,制定和实施抗病毒治疗前的关怀服务,以及有关采购、供应、监控与评价等问题。我们支...     

论公共养老基金的治理结构

一、公共养老基金的代理问题及其对治理结构的影响 各国公共养老基金管理的实践表明，养老基金的治理结构会对基金的投资政策和资产配置策略产生影响，并进而影响公共养老基金的投资绩效。较差的治理结构（亦即不能将基金管理与政治风险相分离）是养老基金绩效较差的一个重要决定因素。因此，科学地设计公共养老基金的治理机构，对于实现公共养老基金的目标，确保公共养老基金利益相关者的福利最大化具有极其重要的意义。     

全球对于耐多药结核病人接触者的政策和措施

背景:从19世纪60年代开始,对结核病潜伏感染者(LTBI)使用异烟肼治疗已经被证明是有效、安全和便宜的,因此对于其他替代治疗方法的研究事实上也就终止了。现在耐多药结核(MDR-TB)广泛传播,但仍然没有数据能够为耐多药病人接触者的管理提供指导。方法:我们选取新病人中耐多药患病率>2%并且制定了耐多药结核病管理规划的国家作为调查对象。通过对这些国家的规划领导人和耐多药结核病项目的项目管理者进行调查,了解这些国家目前对于耐多药病人接触者的处理措施。结果:在符合调查条件的35个国家中,25(71%)个国家参加了此次调查;其中24(96%)个国家已经制定了管理结核病接触者的指南。在25个国家中,有19(76%)个国家经常或总是对结核病接触者进行评估,对结核病潜伏感染(LTBI)进行治疗。与之相反的是,10(40%)个国家报告已经制定了耐多药病人接触者的管理指南;11(44%)个国家经常或总是对耐多药结核接触者进行评价;9(36%)个国家对结核病潜伏感染(LTBI)进行治疗。仅有2个国家采用了治疗耐多药结核病人的方案。对于MDR-TB接触者不提供治疗的主要原因是缺乏证据和指南。结论:由于缺少以证据为基础的指南,现有的...     

结核分枝杆菌rv3295基因的原核表达及单克隆抗体的制备

以结核分枝杆菌H37Rv标准株基因组DNA为模板,通过PCR扩增了rv3295基因;将其克隆至表达载体pET-22b中,构建了重组质粒pET-22b-Rv3295;将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达出了Rv3295蛋白。通过亲和层析纯化,以该重组蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合筛选制备抗该重组蛋白的单克隆抗体;采用Western-blot验证单克隆抗体的特异性;通过亚型鉴定试剂盒鉴定单克隆抗体的亚型。结果显示,Rv3295蛋白以可溶形式表达,蛋白质的分子质量大小为25ku。获得1株抗该重组蛋白的单克隆抗体1F7,其亚型为IgG1/κ;Western-blot结果显示,该抗体具有较好的特异性。本研究制备的Rv3295蛋白的单克隆抗体对于研究Rv3295蛋白的功能及其与DNA之间的互作奠定了基础。     

外伤后睑结膜结核1例

1案例某男，48岁，工人。某年4月6日因纠纷被人用拳头打伤左眼部，因眼部出血，视物不清去医院就诊。检查：左眼周围瘀血肿胀，左下睑结膜有一长约0.5cm斜向裂口，创口较浅，给予清创止血，消炎治疗。伤后1周，左眼创口处出现两个小米粒大小的结节，闭眼时异物感明显，以后逐渐增大，闭眼困难，自行挑破后，一直不能痊愈。1999年11月2日就诊时检查：左下眼睑外翻，闭眼不全，左下睑有一1.0cm×0.5cm团球状溃疡肿块，突出粘膜面，边界不清，触之可动，溃疡面有少量灰黄色似干酪样坏死物。X线胸片：双肺野未见明显活动性病变，双肺上野及左肺…     

心肌室间隔结核球猝球1例

肺外结核包括骨关节结核、结核性腹膜炎、颈淋巴结结核、泌尿生殖系统结核、肠结核、结核性脑膜炎、结核性心包炎及肝、脾、皮肤结核等，而心肌结核极为罕见，现将笔者遇到的１例室间隔内结核球报道如下。１案例某男，５７岁，被他人发现死于卧室内。尸体解剖：死者发育正常，全身消瘦。尸体体表检查发现双下肢足踝部及足背部呈凹陷性水肿，双手指甲床发绀。左右肺胸膜与胸壁粘连，不易剥离；心包与心脏粘连，不易剥离。心脏重４１０g，左心室壁厚１．４cm，右心室壁厚０．５cm。心室间隔距左冠状动脉起始部１cm处心外膜下见一完整包膜包裹…     

牛分枝杆菌重组MPT83蛋白间接ELISA方法的建立

以纯化的牛分枝杆菌重组MPT83蛋白为包被抗原,建立了检测牛分枝杆菌抗体的间接ELISA方法。确定了间接ELISA各组分的最适反应条件:抗原包被浓度为1μg/mL,酶标二抗稀释度为1∶1600,血清稀释度为1∶60,抗原和血清、血清和二抗均在37℃反应30 min,底物在37℃显色15 min,D655 nm阴性、阳性临界值为0.5。经阻断试验、交叉试验、重复性试验,表明该方法特异性强、重复性好。用该方法对18份结核菌素试验阳性牛血清和36份结核菌素试验阴性牛血清进行检测,结果显示,阳性血清的符合率为27.8%,阴性血清的符合率为91.7%。     

结核分枝杆菌与牛分枝杆菌PCR快速鉴别检测方法的建立

根据结核分枝杆菌与牛分枝杆菌基因组的比对分析结果,针对结核分枝杆菌与牛分枝杆菌153bp、RD10和TbD1的3处差异缺失区域设计引物,分别建立了结核分枝杆菌与牛分枝杆菌PCR快速鉴别检测方法.应用建立的3种方法分别对84株结核分枝杆菌、3株牛分枝杆菌、51株非结核分枝杆菌及9种其他常见菌株进行了检测.结果显示,用针对153 bp缺失片段建立的PCR方法分别在结核分枝杆菌及牛分枝杆菌中扩增出645 bp及492 bp的目的条带;用针对RD10、TbD1建立的PCR方法分别在结核分枝杆菌及牛分枝杆菌中扩增出478 bp及361 bp的目的条带、358 bp及524 bp的目的条带.这3种PCR检测方法的准确率和特异性均为100%.敏感性试验结果显示,这些检测方法对结核分枝杆菌和牛分枝杆菌基因组DNA的检测极限均为10 pg.表明,此方法可用于牛源或人源结核分枝杆菌及牛分枝杆菌的快速鉴别检测.