鹦鹉热衣原体外膜抗原特性的研究——鹦鹉热衣原体不同纯化方法的比较试验

应用提纯物玻片姬姆萨氏染色镜检法、光学显微镜跟踪检查法、蛋白质含量紫外吸收检测法和电子显微镜技术对衣原体纯化方法作了比较研究,结果表明泛影葡胺法和改良蔗糖法优于氯仿法,用这两种方法提取的衣原体纯度高,颗粒形态清晰,结构完整,背影杂质少,提取的衣原体蛋白质浓度高。泛影葡胺法和改良蔗糖法可用于鸡胚中增殖的鹦鹅热衣原体的纯化。     

红河州鸡衣原体病的研究——病原分离鉴定和人工感染试验

从采自发病或死亡小鸡的肝、脾、肺和腹水等病料中分离到４株衣原体。将分离物接种７日龄鸡胚卵黄囊，能致鸡胚规律性死亡；该分离株对磺胺嘧啶（ＳＤ）具有抵抗力，碘染色不着色，鉴定为鹦鹉热衣原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａｐｓｉｔａｃｉ）；毒力测定对鸡胚致死毒价为１０－１０ＥＬＤ５０／０．４ｍｌ。用该分离株对健康小雏做人工感染试验，可发生与自然病例相同的症状和病理变化。同时对分离毒株形态特征进行了电镜观察     

北京市及周边省份家禽鹦鹉热嗜性衣原体流行状况的调查

对北京市周边6省份怀疑感染鹦鹉热嗜性衣原体的鸡鸭血清样品374份、病料81份,分别使用IHA诊断试剂盒、ELISA试剂盒以及抗酸染色试剂和荧光抗体诊断试剂进行了检查,以评价北京市及其周边地区家禽鹦鹉热嗜性衣原体的流行性。结果,上述4种试剂检测出的阳性率依次为24.9%、77.9%、18.5%和38.2%;北京市10份SPF鸡血清的抗体全部为阳性;患病肉鸡、肉鸭气囊样品,蛋鸡输卵管样品的检出率较高。表明,北京市及其周边地区家禽已经感染了鹦鹉热嗜性衣原体,酶联免疫吸附法和荧光抗体染色法能分别提高抗体和抗原的检出率。     

云南省红河州山羊流产病原的调查

针对红河州山羊妊娠期流产严重的现象 ,进行了流行病学调查、临床症状观察、病理学检查、实验室诊断、人工感染试验和治疗试验。结果发现 ,妊娠母山羊流产现象覆盖全州 ,且流产率以每年 11.5 0 %的速度递增 ,弓形虫抗体阳性率为 30 .82 % (12 10 / 392 5 ) ,衣原体抗体阳性率为32 .31% (12 6 8/ 392 5 ) ,其中弓形虫和衣原体双重感染阳性羊占 9.35 % (36 7/ 392 5 ) ,未检出布鲁氏菌抗体阳性羊 ;自流产胎儿肺抹片中发现弓形虫滋养体包囊 ,7份流产胎儿中有 6份分离到衣原体 ;用土霉素及复方新诺明治疗有明显效果 ;人工感染试验能复制出与自然病例相同的病例模型。调查结果表明 ,红河州广泛流行的山羊妊娠期流产的病原是弓形虫、衣原体 ,2种病原单一感染或混合感染是造成流产的主要原因。     

乳牛衣原体性流产的病原鉴定及免疫原性研究

对采自甘肃、陕西和宁夏奶牛场的发生不明原因流产乳牛病料进行了间接血凝试验(IHA)、PCR、病原分离鉴定和MOMP基因检测,证实病原为鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci)。对分离株SX5和NX进行毒力稳定性和免疫原性测定,用鸡胚连传20代,SX5和NX株的毒力比较稳定,毒力效价分别为10-11ELD50和10-10ELD50;用这2株菌对小鼠和牛做免疫效力试验,结果显示,免疫鼠5/5和5/5保护,对照鼠0/5保护;免疫牛3/3和3/3保护,对照牛0/3保护。表明,SX5和NX株具有良好的免疫原性,可以作为疫苗研制的候选菌株。     

禽源鹦鹉热衣原体MOMP基因重组腺病毒载体的构建与鉴定

对从疑似禽衣原体病鸡分离鉴定的鹦鹉热衣原体用PCR方法扩增,获得了完整的外膜主蛋白(MOMP)基因,将其克隆到pMD 18-T Simple载体中,用BglⅡ和SalⅠ双酶切出目的基因,并将其与已线性化的pshuttle-CMV穿梭载体连接。然后,将阳性质粒转化入含有腺病毒骨架载体的BJ5183感受态细胞中进行同源重组。将同源重组的腺病毒粒子转入DH5α大肠埃希氏菌增殖。提取同源重组后的腺病毒粒子转染AD-293细胞,待重组腺病毒在AD-293细胞中传代稳定后,经PCR技术检测,扩增到了MOMP目的基因;用间接免疫荧光试验检测,呈阳性反应,证明目的蛋白得到了表达。经测定,重组腺病毒的效价达3.9×1010PFU/mL。     

规模化猪场猪衣原体病的监测——福建省某种猪场母猪群发性流产的诊断

福建省某大型种猪场暴发母猪妊娠后期流产,经血清学试验、病原分离鉴定和小动物感染试验,诊断本病系由鹦鹉热衣原体感染所致。鸡胚分离株ＦＬ 第３ 代的毒力（ＥＬＤ５０） 为１０ ．７ 。