传染性喉气管炎病毒WG株糖蛋白gD基因主要抗原区的表达

为表达传染性喉气管炎病毒(ILTV)gD蛋白,根据GenBank中登录的ILTV全基因组序列(EU675324)设计了1对引物,进行gD全基因的PCR扩增,产物经纯化后连接至pGEM-T Easy载体,进行序列测定,采用DNAStar软件分析gD蛋白的抗原性,选择抗原性强的第256～405aa的编码片段设计引物并进行PCR扩增,结果获得截短的gD基因,将其克隆至原核表达载体pET-32a中,并转化E.coli BL21(DE3)。经IPTG诱导后,获得大小为43.5ku的重组蛋白,命名为r-gD。Western-blot分析结果表明,r-gD具有较强的抗原性。     

大鼠死后心肌和肺脏微管蛋白降解规律的初探研究

目的探讨大鼠死后心肌和肺脏微管蛋白（tubulin）的降解规律与死亡时间（PMI）的关系。方法大鼠经切断股动脉致失血性休克处死后，置于RXZ智能型人工气候箱内，实验条件设定为：20℃恒温，湿度50％。分别于大鼠死后0、1、2、3、5和7d时剖取心肌和肺脏组织，应用Western-Blot法检测心肌和肺脏tubulin的含量，并对所得数据进行统计学分析。结果Tubulin在正常大鼠心肌和肺内高表达，死后1d时其含量已开始下降，至死后7d时仍可检测到微管蛋白的存在，但tubulin在肺脏内的降解速度快于心肌。两种组织内tubulin含量随PMI变化的回归方程及相关系数分别为：心肌Y=-1726．Ix＋14083，r=0．9684；肺脏Y=-1439．89x＋12041，r=0．9808。结论大鼠死后心肌和肺脏tubulin的含量逐渐减少，与PMI具有相关性。     

新城疫病毒HN基因在毕赤酵母中的表达及其表达产物的免疫原性

应用RT-PCR获得新城疫病毒(NDV)La Sota株的血凝素-神经氨酸酶(HN)基因片段,将HN基因片段定向插入毕赤酵母表达载体pPICZaA,构建了分泌型表达载体pPICZaA-HN,将其用Sac I线性化后电转化入P.pastoris X-33.经高抗性及阳性转化子筛选得到重组菌株X-33/pPICZaA-HN,甲醇诱导后,表达产物的上清液经SDS-PAGE、Western-blot和血凝活性检测,结果约在97 ku处有目的条带.比预期分子质量大,占总蛋白的53%,与NDV阳性血清发生特异性免疫反应,并具有较高的血凝活性.表明,HN基因在毕赤酵母中成功地进行了表达且表达产物具有良好的免疫原性.     

失血性休克大鼠肝肾脾细胞微管蛋白死后降解的检测

目的探讨失血性休克大鼠肝肾脾细胞微管蛋白含量变化与死亡时间（PMI）的关系。方法大鼠经切断股动脉致失血性休克死亡后，分别于死亡即刻和死后1、2、3、5和7d剖取脾脏、肝脏及肾脏组织，应用western—blot技术检测微管蛋白含量，SPSS11．5软件对结果进行统计学分析。结果大鼠肝肾脾细胞内微管蛋白含量随PMI的延长而逐渐降低，至死后7d仅可见很淡的微管蛋白印记谱带，其中微管蛋白在肝脏内降解速率最快。3种组织内微管蛋白含量变化的同归方程及相关系数（r）分别为：肝脏Y=-2221．1X＋14844，r=0．9823；脾脏Y=-1871．1X＋11344，r=0．9749；肾脏Y=-1878．1X＋13715，r=0．9629。结论大鼠死后肝肾脾细胞内微管蛋白降解规律与PMI之间具有相关性，并存在组织差异性。     

猪流行性腹泻病毒CH/S株M蛋白全长的原核表达及其反应原性分析

根据猪流行性腹泻病毒(PEDV)CH/S株M蛋白的基因组序列,设计了1对引物,采用RT-PCR方法扩增出M基因,将其克隆至原核表达栽体pMXB10,构建了重组质粒pMXB-M,经测序鉴定正确后转化感受态细胞BL21(DE3),并进行了IPTG诱导表达.结果显示,重组茵pMXB-M表达的融合蛋白MBP-M-CBD(rM)...