间接ELISA检测鸡大肠埃希氏菌菌毛抗体方法的建立

用大肠埃希氏菌O1、O2、O3、O78和O89株制备ELISA抗原,与抗鸡Ig单抗1B7酶结合物建立了检测鸡血清抗体水平的间接ELISA方法.经交叉试验、阻断试验、重复性试验等表明该方法重复性好、特异性强、灵敏度高;确立了将鸡血清100倍稀释检测ELISA效价(ET)的回归方法y=2.453+0.131x(P＞0.05),可用于定量测定.用IH与ELISA方法的比较试验表明,ELISA法比IH法敏感性高4-100倍.     

鸡场库蠓种群组成及活动规律调查

调查了广东省和福建省３ 个市的６ 个鸡场库蠓（ Ｃｕｌｉｃｏｉｄｓ） 的种类、库蠓活动的季节动态及荒川库蠓（ Ｃ．ａｒａｋａｗ ａｉ） 的夜间活动规律。共采集了２５７４ 只库蠓，经鉴定共有６ 个种，即荒川库蠓、尖喙库蠓（ Ｃ．ｓｃｈｕｌｔｚｅｉ） 、奄美库蠓（ Ｃ．ａｍ ａｍｉｅｎｓｉｓ） 、大熊库蠓（ Ｃ．ｏｋｕｍｅｎｓｉｓ） 、端斑库蠓（ Ｃ．ｅｒａｉｒａｉ） 和有须库蠓（ Ｃ．ｐａｌｐｉｆｅｒ） 。其中荒川库蠓和尖喙库蠓为所调查鸡场的优势蠓种，分别占总数的５３ ．７０ ％ 和４５ ．９２ ％ 。３ ～１１ 月是荒川库蠓和尖喙库蠓的活动季节，它们的活动高峰期分别是３ ～６ 月和７ ～９ 月。荒川库蠓７ 月份整夜都活动，并在１９∶００ ～２１∶００ 和０３∶００ ～０５∶００ 呈现２ 个活动高峰。     

伪狂犬病病毒闽A株糖蛋白gD基因去信号肽片段在大肠埃希氏菌中的表达

应用PCR方法从包含伪狂犬病病毒(PRV)Fa株糖蛋白gD基因的重组质粒pB13中扩增出糖蛋白gD基因去信号肽片段,将其克隆到大肠埃希氏菌表达载体pThiohisA中。测序结果表明,糖蛋白gD基因去信号肽片段长1 155 bp,与PRV Fa株糖蛋白gD基因完全一致。经1mmol/L IPTG诱导后,重组质粒pThiohisA-gD在大肠埃希氏菌XL1-blue、Top10、DE3和DH5α中均得到表达,其中在宿主菌XL1-blue中表达量最高。Western-blotting结果显示,大肠埃希氏菌XL1-blue表达的糖蛋白gD具有免疫原性。     

检测987p+肠毒素性大肠埃希氏菌PCR方法的建立

以 98 7p菌毛结构基因保守序列为靶序列 ,设计合成了 1对可扩增 45 9bp目的片段的引物 ,建立了检测肠毒素性大肠埃希氏菌 987p菌毛基因的PCR方法。该方法对K 88 ( 为菌毛阳性 )、K 99 、F 41 参考菌株和链球菌、葡萄球菌、巴氏杆菌的检测结果均为阴性 ;该方法的敏感度可达 10 2 CFU ,对 2 0株腹泻仔猪粪便分离物进行检测 ,有 1株为阳性 ,与血清学检测的结果一致。结果表明 ,此方法特异性和敏感性都很高 ,可用于临床 987p肠毒素性大肠埃希氏菌病的快速诊断和流行病学调查     

鸭疫里氏杆菌鸭源致病性大肠埃希氏菌和鸭沙门菌的RAPD研究

以 4株不同血清型的鸭疫里氏杆菌、5株不同血清型的鸭源致病性大肠埃希氏菌和 5株同一血清型的鸭沙门菌为研究对象 ,分别提取基因组DNA ,利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对其基因组DNA进行了分析。结果 ,从 2 0条随机引物中筛选出了 38条能在这 3种菌中有较好多态性的随机引物 ,8个有效引物共扩增出了 10 2个DNA片段 ,其中 14个菌株共有的谱带仅有 1条 ,显示多态性的片段有 10 1个 ,占 99.0 % ;对RA的 4个菌株扩增出的谱带数为 5 1条 ,共同片段有 12条 ,多态性片段 39条 ,占 76 .5 % ;对沙门菌的 5个菌株扩增出的条带数为 4 6条 ,共同片段为13条 ,多态性片段 33条 ,占 71.7% ;对大肠埃希氏菌的 5个菌株扩增出的条带数为 4 8条 ,共同片段 4条 ,多态性片段 4 4条 ,占 91.7%。在 8条引物中进一步筛选出 1条引物G12 ,其图谱中 5 35bp的条带为鸭疫里氏杆菌所特有 ,330bp的条带为沙门菌所特有 ,12 2 7bp的条带为大肠埃希氏菌所特有 ,表明G12可作为分子标记用来鉴别这 3种细菌。     

银黑狐空肠弯曲菌和致病性大肠埃希氏菌带菌状况的研究

对２２６只银黑狐粪便拭子进行空肠弯曲菌检查，共检出带菌狐１４只，其中成年公狐（４０只）、成年母狐（１２１只）、母仔狐（４０只）和公仔狐（２５只）分别检出３，８，２和１只，检出率依次为７．５％，６．６％，５．０％和４．０％，平均检出率为６．２％。对１８９只银黑狐粪便进行致病性大肠埃希氏菌检查，检出带菌狐３１只，其中成年公狐（１３只）、成年母狐（１２２只）、母仔狐（５１只）和公仔狐（３只），分别检出４，１８，８和１只，检出率依次为３０．８％，１４．８％，１５．７％和３３．３％，平均检出率为１６．４％；共检出致病性大肠埃希氏菌３４株，代表１５个血清型。对６９只银黑狐粪便检查，未检出Ａ～Ｆ群沙门氏菌及Ａ群Ⅰ、Ａ群Ⅱ、Ｂ群和Ｄ群的志贺氏菌。对一起３日龄仔狐死亡原因调查，证实是由肠道致病性大肠埃希氏菌Ｏ１１４Ｋ９０所致。     

柔嫩艾美球虫扬州株SO7抗原基因表达条件的研究

通过RT-PCR扩增柔嫩艾美球虫YZ株折光体SO7抗原基因,并进行克隆和测序。将不含信号肽编码区片段的SO7基因克隆入表达载体pGEX-6p-1谷胱甘肽-S-转移酶基因的下游,构建表达质粒pGEX-6p-1-SO7,转化宿主菌BL21,获得重组菌。通过建立生长曲线,对诱导条件的摸索,根据SDS-PAGE确定融合蛋白的最佳表达条件。通过融合蛋白切胶免疫小鼠制备超免疫血清,经间接ELISA检测其与E.tenella子孢子抗原反应的特异性。结果显示,诱导时机和诱导时间是影响表达的主要因素,诱导温度、IPTG浓度次之;诱导时机以3 h为最佳,诱导时间以4.5 h为最佳;诱导温度以37℃最佳,0.008~1.000mmol/L的IPTG对表达量的影响不大。在优化的表达条件下,表达产物主要以包涵体存在,表达量占菌体总蛋白的37.5%。间接ELISA结果表明融合蛋白具有一定的免疫原性,保留了天然蛋白的部分抗原性。     

Animal-related fatalities--part II: characteristic autopsy findings and variable causes of death associated with envenomation, poisoning, anaphylaxis, asphyxiation, and sepsis

In addition to blunt and sharp trauma, animal-related fatalities may result from envenomation, poisoning, anaphylaxis, asphyxiation, and sepsis. Although the majority of envenomation deaths are caused by hornets, bees, and wasps, the mechanism of death is most often anaphylaxis. Envenomation resulting from the injection of a poison or toxin into a victim occurs with snakes, spiders, and scorpions on land. Marine animal envenomation may result from stings and bites from jellyfish, octopus, stonefish, cone fish, stingrays, and sea snakes. At autopsy, the findings may be extremely subtle, and so a history of exposure is required. Poisoning may also occur from ingesting certain fish, with three main forms of neurotoxin poisoning involving ciguatera, tetrodotoxin ingestion, and paralytic shellfish poisoning. Asphyxiation may follow upper airway occlusion or neck/chest compression by animals, and sepsis may follow bites. Autopsy analysis of cases requires extensive toxinological, toxicological, and biochemical analyses of body fluids.     

Fournier Gangrene and Unexpected Death

Abstract: Fournier gangrene represents a rare but progressive perineal infection that may result in rapid death. A 70‐year‐old man with poorly controlled diabetes mellitus and alcohol abuse is reported who was found unexpectedly dead. He had last been contacted the night before his death. At autopsy, the most striking finding was deep necrotic ulceration of the scrotum with exposure of underlying deep muscles and testicles, with blood cultures positive for Escherichia coli. Death was, therefore, attributed to necrotic ulceration/gangrene of the perineum (Fournier gangrene) that was due to E. coli sepsis with underlying contributing factors of diabetes mellitus and alcoholism. In addition there was morbid obesity (body mass index 46.9), cirrhosis of the liver, and marked focal coronary artery atherosclerosis with significant cardiomegaly. Fournier gangrene may be an extremely aggressive condition that can result in rapid death, as was demonstrated by the rapid progression in the reported case.     

猪场环境中大肠杆菌的耐药性检测及其耐药机理

为探讨猪场环境中大肠杆菌的耐药性及其耐药机理,随机选取从规模养猪场环境中分离的31株大肠杆菌,采用药敏纸片法检测其耐药性、PCR法检测其qnrA和aac(6’)-Ib基因存在状况,然后采用高温-SDS法对其中1株分离菌进行耐药质粒消除试验。结果显示,所分离的31株大肠杆菌对青霉素、四环素、洁霉素、红霉素、罗红霉素等抗生素呈现不同程度的耐药性;在所有试验菌株中未检出qnrA基因,而可检出aac(6’)-Ib基因的有8株;通过对含aac(6’)-Ib基因质粒的消除,分离菌株可获得对氨基糖苷类和喹诺酮类抗生素的敏感性。表明猪场环境中的大肠杆菌对临床常用药物产生了广泛的耐药性,而含aac(6’)-Ib基因质粒可介导环境中的大肠杆菌对氨基糖苷类和喹诺酮类抗生素耐药。