黄芪三仙汤通过海马神经肽Y调节细胞免疫功能的实验研究

目的:探讨黄芪三仙汤调节细胞免疫功能作用机制。方法:将24只雄性大鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组。将1μlβ-淀粉样蛋白(Aβ)1-40(10μg/μl)在立体定向仪下注入模型组和治疗组大鼠右侧Meynert核复制阿尔茨海默病(AD)模型,治疗组用黄芪三仙汤灌胃,于4周末观察各组海马区神经肽Y(NPY)、血浆中促肾上腺皮质激素(ACTH)、血清中皮质酮(CORT)含量,胸腺指数,脾脏巨噬细胞数目的变化。结果:模型组大鼠海马组织中NPY的释放减少,血浆中ACTH和血清中CORT含量显著降低,脾脏巨噬细胞数目显著增加(P<0.01)。治疗组NPY的释放增加,血浆中ACTH和血清中CORT含量显著升高,脾脏巨噬细胞数目明显减少(P<0.01)。结论:黄芪三仙汤可以通过海马-NPY-垂体-肾上腺轴调节细胞免疫功能。     

加减薯蓣丸治疗轻中度肾精亏虚证老年期痴呆的磁共振波谱研究

目的 采用氢质子磁共振波谱（1H magnetic resonance spectroscopy,1H MRS）检查结合神经心理学量表的方法,评价加减薯蓣丸对老年期痴呆患者的治疗效果。方法 收集2015年12月至2017年4月湖北省中医院脑病科及老年病科的血管性痴呆（vascular dementia,VD）及阿尔茨海默病（Alzheimers disease,AD）肾精亏虚证患者各20例,另选认知功能正常者20例作为对照组。入选老年期痴呆患者在内科治疗的基础上予以加减薯蓣丸治疗。对老年期痴呆患者治疗前后及对照组受试者进行简易精神状态评价量表（mini mental state examination,MMSE）、日常生活能力量表（activities of daily living,ADL）、痴呆证候分型量表（syndromes differentiation scale for dementia,SDSD）评估及1H MRS检查。结果 加减薯蓣丸显著升高VD及AD患者降低的MMSE评分（P＜0.05）,降低其升高的SDSD评分（P＜0.05）,但对ADL评分的改善作用无统计学意义（P＞0.05）。1H MRS检查表明,加减薯蓣丸显著升高VD和AD患者双侧额叶下降的N 乙酰天门冬氨酸（N aspart acetyl,NAA）/肌酸（creatine,Cr）水平（P＜0.05）,而降低双侧额叶升高的胆碱复合物（choline,Cho）/Cr作用无统计学意义（P＞0.05）。加减薯蓣丸对VD患者和AD患者MMSE、SDSD、ADL评分和双侧额叶NAA/Cr、Cho/Cr的作用差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 加减薯蓣丸改善轻中度老年期痴呆患者认知功能的机制可能与促进损伤的神经细胞修复有关。     

基于网络药理学和分子对接验证技术探讨贯叶金丝桃抗阿尔茨海默病的作用机制

目的 利用网络药理学及分子对接技术研究贯叶金丝桃治疗阿尔茨海默病（Alzheimers disease,AD）的潜在作用机制。方法 在TCMSP及TCM Database@Taiwan数据库查找贯叶金丝桃的化学成分并进行活性成分筛选;利用化源网、PubChem、SwissTargetPrediction及ChEMBL数据库获取活性成分的作用靶点,检索GeneCards、OMIM、DrugBank和DisGeNET数据库,结合文献检索获取AD的疾病靶点。取两者交集靶点,利用STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用网络。采用Metascape平台对靶点进行GO富集分析和KEGG富集分析,通过Cytoscape 3.10.0软件构建“化合物-靶点-通路”网络并进行拓扑学分析,并采用AutoDock Vina 1.1.2进行分子对接验证。结果 贯叶金丝桃防治痴呆的关键化合物是贯叶金丝桃素金、丝桃素及金丝桃苷等,其对应的关键靶点为APP、PIK3R1、PIK3CA、AKT1、EGFR、GSK3B等,分子对接验证结果显示其主要活性成分与核心靶点均具备潜在活性。所涉及的主要分子过程及通路为激酶活性的正调控、神经活性配体-受体相互作用及激酶活性调节等,关键通路为AD通路和PI3K-Akt信号通路。结论 贯叶金丝桃治疗AD的机制可能与减少β-淀粉样蛋白的产生及tau蛋白形成,调节神经炎症相关。     

基于“肾脑相济”理论探讨艾灸对阿尔茨海默病大鼠海马AMPK/mTOR信号通路的影响

目的 观察艾灸对阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）大鼠腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine 5-monophosphate activated protein kinase, AMPK)/雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路相关递质表达的影响,探讨艾灸治疗AD的作用机制。方法 将SD大鼠按照随机数字表法分为正常组8只、模型组32只,采取侧脑室注射β淀粉样蛋白(amyloid β-protein,Aβ)25-35的方法建立大鼠AD模型。将模型复制成功的大鼠随机分为模型组、药物组、艾灸组,每组8只。艾灸组大鼠用艾条灸“百会”“肾俞”“三阴交”,每次15 min,同时按3 mg/kg灌胃蒸馏水;药物组大鼠按3 mg/kg灌胃盐酸多奈哌齐;对照组及模型组大鼠按3 mg/kg灌胃蒸馏水。采用Morris水迷宫法检测大鼠行为学表现,苏木精—伊红染色法观察大鼠海马病理组织改变,Western blot法检测大鼠海马磷酸化雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamycin, p-mTOR)、核糖体蛋白S6 激酶(ribosomal protein S6 kinase p70,P70S6K)、 自噬相关基因5(autophagy-related gene 5,ATG5)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(phosphorylated adenosine 5-monophosphate activated protein kinase,p-AMPK)、微管相关蛋白1轻链3B（microtubule associated protein light chain 3B,LC3B）-Ⅱ／LC3B-Ⅰ的表达水平。结果 苏木精—伊红染色结果表明,模型组海马神经元萎缩明显,与模型组比较,药物组和艾灸组海马神经元形态及分化程度均有明显改善。与正常组比较,模型组大鼠的逃避潜伏期显著延长（P＜0.05）,p-mTOR及P70S6K 表达水平均显著升高（P＜0.05）,ATG5、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ、p-AMPK表达水平均显著降低（P＜0.05）。与模型组比较,药物组和艾灸组大鼠的逃避潜伏期均显著缩短（P＜0.05）, p-mTOR及P70S6K 表达水平均显著下降（P＜0.05）,ATG5、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ、p-AMPK表达水平均显著上升（P＜0.05）。与药物组比较,艾灸组大鼠逃避潜伏期显著缩短（P＜0.05）;p-mTOR及P70S6K表达水平显著降低（P＜0.05）,ATG5、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ、p-AMPK表达水平均显著上升（P＜0.05）。结论 艾灸能够调控AMPK/mTOR信号通路,诱导细胞自噬,阻断脑内Ａβ表达,从而改善认知功能。     

黄蒲通窍胶囊对阿尔茨海默病模型大鼠Wnt/Ca2+信号通路的影响

目的 观察黄蒲通窍胶囊对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型大鼠学习记忆的影响,探究其潜在作用机制.方法 将30只SD大鼠随机分为空白组、模型组、黄蒲通窍胶囊组,每组10只,腹腔注射D-半乳糖联合双侧海马注射Aβ25-35复制AD大鼠模型;给药28 d,采用Mor-ris水迷宫实验检测大鼠的...     

加减薯蓣丸对阿尔茨海默病模型大鼠海马区TREM2及Iba1蛋白表达的影响

目的 探讨加减薯蓣丸对阿尔茨海默病(Alzheimers disease,AD)模型大鼠海马区髓细胞触发受体2(triggering receptor expressed on moyeloid cells 2,TREM2)、Iba1蛋白表达水平及对Iba1+细胞数量的影响。方法 采用SD大鼠双侧侧脑室注射β淀粉样蛋白1-42建立AD模型,将模型复制成功的大鼠分为模型组、中药组,并设正常组进行对照,每组10只。正常组、模型组大鼠每日给予10 mL/kg生理盐水灌胃,中药组大鼠每日给予加减薯蓣丸10 g/kg灌胃,连续灌胃4周后,应用Western blot法检测海马区TREM2和Iba1蛋白表达水平,免疫荧光染色标记Iba1+细胞数量。结果 与正常组比较,模型组TREM2蛋白表达水平显著增加（P＜0.05）;与模型组比较,中药组TREM2蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,Iba1蛋白表达水平显著增加（P＜0.05）,中药组海马区Iba1+细胞数量明显增加（P＜0.05）。结论 加减薯蓣丸可能通过影响海马区TREM2及Iba1蛋白水平的表达,增加Iba1+细胞数量,发挥对AD的治疗作用。     

绿萼梅抗β淀粉样蛋白致阿尔茨海默病细胞模型活性部位的筛选及其化学成分分析

目的 筛选绿萼梅水提物抗β淀粉样蛋白（amyloid β,Aβ）致阿尔茨海默病（Alzheimers disease,AD）细胞模型的活性部位,并对活性较好的部位进行化学成分辨识。方法 采用水和不同浓度乙醇提取绿萼梅活性部位,再用AB-8型大孔吸附树脂富集并制备绿萼梅4个不同洗脱部位样品,采用Aβ诱导的SH-SY5Y细胞AD模型筛选绿萼梅不同部位样品活性,借助超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱对活性较好的部位进行成分鉴定。结果 不同浓度乙醇洗脱物对Aβ诱导的SH-SY5Y细胞毒性均有较好的抑制作用（P<0.05）,药效呈现出浓度依赖性,其中60%、90%乙醇洗脱物作用极为显著（P<0.05）;从两个活性部位共鉴定出24个化合物,包括16个黄酮类成分,4个苯丙素类成分和4个其他类成分;两个活性组分中共有成分14个,其中主要为黄酮类成分。结论 60%乙醇洗脱部位和90%乙醇洗脱部位是抗Aβ毒性的活性部位,黄酮类成分为该活性部位的主要物质基础。     

参归益智方对阿尔茨海默病大鼠海马组织VEGF、p-p38 MAPK表达的影响

目的 观察参归益智方对阿尔茨海默病（Alzheimers disease,AD）大鼠行为学障碍的改善作用并探究其作用机制。方法 将40只SD大鼠随机分为空白组,模型组,参归益智方低、高剂量组,每组10只。采用β淀粉样蛋白1-42双侧注射大鼠海马区诱导AD模型,通过Morris水迷宫检测AD大鼠行为学改变,采用Western blotting检测大鼠海马组织血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、p38丝裂原活化蛋白激酶（ p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK）及磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（phosphorylation of p38 mitogen-activated protein kinase,p-p38 MAPK）的表达水平。结果 给药4周末,参归益智方能够剂量依赖地降低AD大鼠Morris水迷宫试验的逃避潜伏期（P<0.05）,显著提高穿越平台次数（P<0.05）,剂量依赖地提高AD大鼠海马VEGF表达水平,显著降低AD大鼠海马p-p38 MAPK表达水平。结论 参归益智方改善AD大鼠行为学障碍的作用与其提高海马区VEGF表达,降低p-p38 MAPK表达有关。     

大豆异黄酮对阿尔茨海默病大鼠乙酰胆碱代谢的影响

目的 观察大豆异黄酮（soybean isoflavone,SIF）对阿尔茨海默病（Alzheimer''s disease,AD）模型大鼠海马乙酰胆碱（acetylcholine,ACh）代谢的影响,探讨SIF治疗AD的作用机制。方法 将50只大鼠随机分为假手术组,模型组,戊酸雌二醇组和SIF高、低剂量组,采用双侧海马注射β-淀粉样蛋白(amyloid β-protein,Aβ)复制AD大鼠模型,分别给药21 d后,采用Morris水迷宫实验观察大鼠学习记忆能力的变化,免疫组织化学法检测大鼠海马组织ACh、胆碱乙酰转移酶（choline acetyl transferase,ChAT）、乙酰胆碱酯酶（acetylcholine esterase,AchE）的表达。结果 SIF可显著降低AD大鼠的逃避潜伏期（P<0.01）,显著增加AD大鼠的游泳时间百分比、穿过平台次数以及海马组织ACh、ChAT、AchE的表达（P<0.05,或P<0.01）。结论 SIF可能通过增强海马组织ACh的代谢起到提高学习记忆能力的作用。