丹皮酚对高脂血症大鼠肝脏脂质代谢及自噬的影响

目的 探讨丹皮酚（Paeonol,Pae）对高脂血症大鼠肝脏脂质代谢及自噬的影响,为揭示Pae抗动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）早期病变的作用机制提供依据。方法 采用维生素D2及高脂饲料联合应用法复制大鼠高脂血症模型,将大鼠分成Pae高剂量（300 mg/kg）、中剂量（150 mg/kg）、低剂量（75 mg/kg）组,雷帕霉素组（0.2 mg/kg）,阿托伐他汀组（5 mg/kg）,分别每天灌胃一次,连续6周,模型组和正常组给予等容量溶媒灌胃。采用全自动生化分析仪检测血脂和肝脂水平,光镜下对肝脏脂肪变性程度进行评分,电镜下观察自噬小体,免疫组织化学法观察肝脏中自噬相关因子微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ型（microtubule-associated protein 1 light 3, type 2,LC3Ⅱ）、p62及过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ）的表达。结果 Pae可以降低血清和肝脏中甘油三酯、总胆固醇水平及肝系数,减轻肝脏脂肪变性程度,减少脂滴数量,促进自噬小体的产生,上调肝细胞中LC3Ⅱ、PPARγ表达,下调p62表达。结论 Pae可以促进脂质代谢并升高肝脏自噬小体形成及相关因子表达。     

新藤黄酸诱导脑胶质瘤细胞U87自噬的研究

目的 观察不同浓度新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）对脑胶质瘤细胞U87增殖及自噬的影响。方法 倒置显微镜下观察细胞形态变化,采用噻唑蓝法检测细胞的存活率,单丹磺酰尸胺（monodansylcadaverine,MDC）染色法检测自噬泡的形成,吖啶橙（acridine orange,AO）染色流式细胞仪观察酸性囊泡细胞器的数量变化,Westernblot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3）- Ⅱ/LC3- Ⅰ以及Beclin- 1的表达变化。结果 GNA在1~32 μmol/L浓度范围抑制U87细胞的增殖;MDC染色表明GNA促进U87细胞内自噬泡的形成;AO染色表明GNA增加U87细胞内酸性囊泡细胞器的数量;Western blot结果显示,GNA作用U87细胞后,LC3- Ⅱ/LC3- Ⅰ比值增大,Beclin- 1的表达增加,提示细胞内自噬活性增强。结论 GNA在一定剂量和时间范围内抑制脑胶质瘤细胞U87细胞的增殖可能与诱导U87细胞自噬的发生有关。     

当归补血汤调节自噬干预心肌梗死模型大鼠心肌损伤的作用机制

目的 观察当归补血汤对心肌梗死模型大鼠心肌损伤的影响并探究其作用机制。方法 将大鼠随机分为假手术组,模型组,当归补血汤低、高剂量组和地尔硫■组。连续给药7 d后结扎大鼠冠状动脉左前降支复制心肌梗死模型。缺血24 h后,采用TTC染色检测心肌梗死面积,苏木精-伊红染色检测心肌的组织形态,微板法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)水平,ELISA法检测肌酸激酶心肌型同工酶(creatine kinase-myocardial band, CK-MB)水平,Western blot法检测磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(phosphorylate phosphatidylinositol 3-kinase, p-PI3K),磷酸化蛋白激酶B(phosphorylate protein kinase B,p-AKT),磷酸化雷帕霉素靶蛋白(phosphorylate mammalian target of rapamycin, p-mTOR)及自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1及p62蛋白的表达水平。结果 当归补血汤能明显减少心肌梗死面积(P<0.05)...     

“The big sleep: Elucidating the sequence of events in the first hours of death to determine the postmortem interval”

Recent developments on postmortem interval estimation (PMI) take an advantage of the autolysis process, pointing out to the analysis of the expression of apoptosis and autophagy genes towards this purpose. Oxidative stress plays a role in this signaling as a regulatory mechanism and/or as a consequence of cell death. Additionally, melatonin has been implicated on apoptosis and autophagy signaling, making melatonin a suitable target for PMI determination. The aim of this study was to investigate the early PMI through the analysis of the expression of autophagy genes as well as oxidative stress and melatonin receptor. Our results demonstrated a rapidly increased on the expression of autophagy genes according to the expected sequence of events, then a marked decrease in this expression, matched with the switch to the apoptosis signaling. These results revealed potential candidates to analyze the PMI in the first hours of death, helping to estimate the time-since-death.     

从气虚络瘀论特发性肺纤维化自噬机制

中医理论认为,特发性肺纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis, IPF）的关键病机在于“气虚络瘀”。IPF患者自噬水平不足,不能及时清除异常病理物质,造成细胞外基质过度沉积而致肺纤维化。这与气虚无力推动新陈代谢,形成病理产物堆积,进而壅滞肺络,最终导致肺叶痿弱而不用相对应。因此,自噬不足导致的病理过程可视为“气虚络瘀”病机的微观机制,运用气虚络瘀理论阐释IPF自噬机制并通过调控自噬以防治本病可能成为新的重要靶点。     

基于mTOR/Beclin1通路探讨血竭散对克罗恩病大鼠结肠组织自噬和炎症小体的影响

目的 研究血竭散对克罗恩病大鼠结肠组织自噬和炎症小体的影响,探讨其治疗克罗恩病的作用机制.方法 采用2,4,6-三硝基苯磺酸诱导复制克罗恩病大鼠模型.模型复制后,将36只大鼠随机分为空白组,模型组,血竭散低、中、高剂量组和柳氮磺砒啶(sulfasalazine,SASP)组,每组6只.苏木精-伊红染色法观察大鼠结肠组织...     

新藤黄酸抑制人肝癌细胞BEL-7402自噬作用研究

目的观察新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)对人肝癌细胞BEL-7402自噬的影响,为GNA抗肿瘤研究提供理论依据。方法体外培养人肝癌BEL-7402细胞株,采用MTT法检测GNA对人肝癌细胞BEL-7402存活率的影响;倒置显微镜观察给药前后细胞形态变化;单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)染色,荧光显微镜观察细胞自噬小体;透射电子显微镜进一步观察自噬小体;Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1light chain 3,LC3)和p62、Beclin1的表达水平及加入自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin,Rap)和自噬抑制剂氯喹(chloroquine,CQ)后自噬相关蛋白的表达情况。结果 GNA能显著抑制人肝癌细胞BEL-7402的增殖并呈时效及量效关系;倒置显微镜观察结果显示GNA组细胞随药物浓度增大,细胞悬浮增多,高浓度给药组细胞出现碎片化;荧光显微镜下观察结果显示,随药物浓度的增加,荧光点状聚集增多;透射电子显微镜观察发现,随GNA浓度的增加,细胞内自噬空泡数量增多,与对照组比较,加入自噬诱导剂Rap后,自噬空泡数量显著增多;Western blot法检测结果显示,随GNA浓度的增加,Beclin1、p62、LC3-Ⅱ蛋白表达水平均增加(P<0.05),LC3-Ⅰ无明显变化,表明BEL-7402细胞自噬前期被激活,后期进程被抑制。结论 GNA能抑制人肝癌细胞BEL-7402的增殖,其机制可能部分是通过抑制自噬后期自噬体与溶酶体的融合,抑制人肝癌BEL-7402细胞的保护性自噬。