| 猪轮状病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 陈小金,陈建飞,时洪艳,张志榜,冯力. 猪轮状病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 中国兽医科学, 2010, 40(2) |
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| 作者姓名： | 陈小金 陈建飞 时洪艳 张志榜 冯力 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,猪传染病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001 |
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| 基金项目： | 国家"十一五"科技支撑计划项目 |
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| 摘 要： | 根据GenBank中登录的A群猪轮状病毒(PoRV)代表株OSU毒株序列,针对VP7基因设计了1对特异性引物,将150bp目的片段与pMD18-T载体连接构建标准品,建立了检测A群PoRV的SYBR GreenⅠreal-timePCR方法,并对该方法的敏感性、特异性和重复性进行了评价。结果显示,该方法在1.3×108copies/μL～1.3×102copies/μL范围内线性关系良好,相关系数为0.999;最低检测限为1.3×101copies/μL;用该方法检测猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪病毒性腹泻病毒均为阴性;批内及批间变异系数均低于2%。表明,该方法敏感性高、特异性强、重复性好。用该方法抽检58份疑似病例的腹泻病料,结果检出53份阳性,同时用普通RT-PCR和快速检测试剂盒对这些病料进行检测,结果分别检出42份和32份阳性。用这3种方法对11例已知阳性的临床粪便样品进行检测,结果建立的检测方法与其他两种方法的符合率为100%。用该方法检测PoRV细胞培养物中的病毒载量为1.0×105copies/μL。结果表明,建立的检测方法为PoRV的早期诊断、分子流行病学调查以及疫苗质量的监测等提供了新的快速检测技术。
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| 关 键 词： | 猪轮状病毒 SYBR Green Ⅰ 实时荧光定量PCR SYBR Green-Ⅰ |
Development of a SYBR Green I real-time PCR assay for detection of porcine rotavirus |
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| CHEN Xiao-jin,CHEN Jian-fei,SHI Hong-yan,ZHANG Zhi-bang,FENG Li. Development of a SYBR Green I real-time PCR assay for detection of porcine rotavirus[J]. Chinese Veterinary Science, 2010, 40(2) |
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| Authors: | CHEN Xiao-jin CHEN Jian-fei SHI Hong-yan ZHANG Zhi-bang FENG Li |
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| Affiliation: | CHEN Xiao-jin,CHEN Jian-fei,SHI Hong-yan,ZHANG Zhi-bang,FENG Li(State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology/Division of Swine Infectious Diseases,Harbin Veterinary Research Institute of Chinese Agricultural Sciences,Harbin 150001,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | porcine rotavirus real-time PCR |
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