| 长角血蜱酸性磷酸酶全长cDNA的克隆与原核表达及其表达产物的酶活性分析 |
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| 引用本文： | 张萍,刘光远,田占成,谢俊仁,罗金. 长角血蜱酸性磷酸酶全长cDNA的克隆与原核表达及其表达产物的酶活性分析[J]. 中国兽医科学, 2011, 0(5) |
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| 作者姓名： | 张萍 刘光远 田占成 谢俊仁 罗金 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室; |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863)项目(2009AA10Z402); 甘肃省自然科学基金项目(096RJZA128) |
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| 摘 要： | 通过对长角血蜱饥饿雌性成蜱cDNA表达文库中筛选到的未知基因进行5′RACE扩增,得到了长角血蜱酸性磷酸酶全长cDNA序列。利用生物信息学方法对该基因的核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行了分析,同时构建了系统发育树。采用PCR方法扩增目的基因完整的开放阅读框,将其克隆到表达载体pGEX-4T-1中,构建重组质粒,转入BL21(DE3)中,经IPTG进行诱导表达,分别用SDS-PAGE和Wes-tern-blot分析目的蛋白的表达情况和反应原性,同时进行体外酶活性分析。结果表明,成功获得了长角血蜱酸性磷酸酶全长序列,体外高效诱导表达了约67.0 ku的重组蛋白。Western-blot表明该蛋白具有很强的反应原性,且在pH5.0时,该酶水解对硝基苯磷酸二钠的能力最强。
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| 关 键 词： | 长角血蜱 酸性磷酸酶 克隆 原核表达 酶活性分析 |
Cloning and prokaryotic expression of full-length cDNA encoding acid phosphatase from Haemaphysalis longicornisand analysis of enzyme activity of the expressed protein |
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| ZHANG Ping,LIU Guang-yuan,TIAN Zhan-cheng,XIE Jun-ren,LUO Jin. Cloning and prokaryotic expression of full-length cDNA encoding acid phosphatase from Haemaphysalis longicornisand analysis of enzyme activity of the expressed protein[J]. Chinese Veterinary Science, 2011, 0(5) |
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| Authors: | ZHANG Ping LIU Guang-yuan TIAN Zhan-cheng XIE Jun-ren LUO Jin |
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| Affiliation: | ZHANG Ping,LIU Guang-yuan,TIAN Zhan-cheng,XIE Jun-ren,LUO Jin(Key Laboratory of Veterinary Parasitology of Gansu Province/State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology/Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Lanzhou 730046,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Haemaphysalis longicornis acid phosphatase cloning prokaryotic expression analysis of enzyme activity |
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