| A群猪轮状病毒G5型OSU株VP7基因的克隆及其重组杆状病毒的鉴定 |
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| 作者姓名： | 徐宏军 师东方 李一经 王君伟 贾永清 |
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| 作者单位： | 东北农业大学,动物医学院,黑龙江,哈尔滨,150030 |
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| 摘 要： | 利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出A群猪轮状病毒(PRV)G5型OSU株长度约为1.0kb的基因片段,将其克隆到pMD 18-T载体上进行测序鉴定,证明为该PRV的VP7蛋白基因,与已发表的该PRV VP7基因序列的同源性为99.8%.将该基因黏端克隆至表达载体PblueBAChisC质粒中,酶切及PCR鉴定表明获得了PRV-VP7蛋白基因与PblueBAChisC质粒的阳性重组子.纯化该重组质粒并与线性杆状病毒DNA分子Bac-N-Blue共转染昆虫细胞sf9,5 d后收获重组病毒.通过对重组杆状病毒DNA分子的酶切及PCR鉴定,确定PRV-VP7基因已正确插入.将经3次蚀斑筛选纯化后的该重组杆状病毒接种于sf9细胞大量增殖后,获得了重组杆状病毒PRV-VP7蛋白的真核表达.
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| 关 键 词： | 猪轮状病毒 VP7基因 克隆 重组杆状病毒 |
| 文章编号： | 1000-6419(2002)06-0018-03 |
| 修稿时间： | 2001-11-22 |
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