| 环形泰勒虫微线体-棒状体基因的原核表达及表达产物的免疫原性分析 |
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| 引用本文： | 岑双庆,李有全,陈 泽,张 晓,李安岩,何海宁,刘志杰,杨吉飞,关贵全,牛庆丽,刘爱红,任巧云,罗建勋,殷 宏.环形泰勒虫微线体-棒状体基因的原核表达及表达产物的免疫原性分析[J].中国兽医科学,2014(6):599-604. |
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| 作者姓名： | 岑双庆 李有全 陈 泽 张 晓 李安岩 何海宁 刘志杰 杨吉飞 关贵全 牛庆丽 刘爱红 任巧云 罗建勋 殷 宏 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室; |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973)项目(2010CB530206);国家自然科学基金资助项目(31272556,30972182,31072130,31001061);国家引进国际先进农业科学技术计划(948)项目(2010-S04);甘肃省重点项目(1002NKD035) |
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| 摘 要： | 为了解环形泰勒虫微线体-棒状体蛋白的生物学特性,通过生物信息学分析,选取环形泰勒虫微线体-棒状体蛋白特异性和抗原性最高的一段开放阅读框进行RT-PCR扩增,将所获基因片段连接到原核表达载体pGEX-4T-1中进行表达,将表达产物纯化后免疫家兔制备该蛋白的多克隆抗体。通过SDS-PAGE和Western-blot分析该基因的原核表达情况和表达产物的反应原性。生物信息学分析发现,该蛋白第470~650位氨基酸残基的特异性和抗原性最高。对诱导条件的摸索发现,在37℃、1.0mmol/L IPTG条件下诱导6h表达量最高,表达产物大小为43ku。Western-blot结果显示,该蛋白能被环形泰勒虫阳性的牛血清所识别,具有很好的反应原性。本研究制备的多克隆抗体为后期研究微线体-棒状体蛋白与宿主细胞的相互作用奠定了基础。
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| 关 键 词： | 环形泰勒虫 微线体-棒状体蛋白 原核表达 Western-blot |
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