脑心肌炎病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立及初步应用 |
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引用本文: | 王丹,冯若飞,张海霞,凡静静,谢晶莹,马忠仁,冯玉萍.脑心肌炎病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立及初步应用[J].中国兽医科学,2013(10):1067-1072. |
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作者姓名: | 王丹 冯若飞 张海霞 凡静静 谢晶莹 马忠仁 冯玉萍 |
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作者单位: | 西北民族大学生物工程与技术国家民委重点实验室;西北民族大学生命科学与工程学院;甘肃省动物细胞工程技术研究中心 |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目(31160033);中央高校基本科研业务费专项(ZYZ2012087) |
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摘 要: | 为建立快速检测脑心肌炎病毒(EMCV)的环介导等温扩增方法(LAMP),参照GenBank中EMCV基因组序列(X74312.1),针对EMCV的3D基因保守区域设计并合成了4条引物,对建立的反应体系进行条件优化,并进行特异性、敏感性试验及临床样本的检测。结果显示,成功建立了EMCV LAMP检测方法,且当内、外引物浓度比例为5∶1(即内、外引物浓度分别为50μmol/L、10μmol/L),反应温度为64℃,反应时间为60min时反应体系可达最佳。特异性和敏感性试验表明,该方法能够特异性地检测EMCV,且敏感性比常规RT-PCR法高10倍。分别用建立的LAMP法与ELISA法对临床样本进行检测,结果二者的符合率为97%。表明建立的LAMP方法特异性强、敏感性高,可适用于EMCV临床样本的快速检测。
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关 键 词: | 脑心肌炎病毒 环介导等温扩增技术 检测 |
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