肉鸡线粒体型硫氧还蛋白的原核表达及抗氧化特性评价

为了研究肉鸡线粒体型硫氧还蛋白(GgTrx2)的功能,提取肉鸡肝总RNA,经RT-PCR扩增去除信号肽序列的GgTrx2基因,构建原核表达载体pET-28a(+)-GgTrx2,转化入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达;以Ni-NTA纯化重组蛋白并评价其活性;分析GgTrx2对脂多糖(LPS)诱导的鸡肝细胞氧化应激的影响。结果显示,构建的原核表达载体pET-28a(+)-GgTrx2在37℃经1.0mmol/L IPTG诱导4h蛋白表达效果最好,经Ni-NTA柱纯化后纯度达90%以上,质量浓度为5.0mg/mL。该重组蛋白具有较高的还原胰岛素二硫键的能力,并呈现浓度效应。抗氧化功能分析表明,GgTrx2预处理能显著降低LPS诱导的鸡肝细胞膜脂过氧化和保护抗氧化酶SOD和CAT的活性。结果表明,本研究原核表达的GgTrx2蛋白具有良好的生物学活性和抗氧化应激特性,为进一步阐明其生物学功能和用于治疗氧化应激性疾病奠定了基础。