牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒及牛支原体三重Nano-PCR方法的建立与初步应用

为了同时检测临床上牛常见的三种呼吸道重要病原体，本研究针对牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）和牛支原体（MB）保守基因进行引物设计，并成功构建标准阳性质粒。使用纳米金颗粒将普通PCR方法优化，建立了三重Nano-PCR检测方法。结果显示，三重Nano-PCR检测方法可同时检测出BVDV、IBRV和MB的阳性质粒（1μL）最低检测分别为1 fg、100 ag、10 fg，灵敏度分别为常规PCR的10、10、100倍。临床结果显示，30份采集于临床呼吸道病牛样品中，BVDV、IBRV和MB的Nano-PCR的检测阳性率分别为33.33%、36.67%、33.33%，而普通PCR的检测阳性率分别为26.67%、30%、20%，提示BVDV和IBRV混合感染最多，阳性率可达26.67%。三重Nano-PCR方法特异性良好，检测其他牛呼吸道相关病原体BCV、BPIV3和BRV时结果均呈阴性。本研究建立的快速灵敏且特异良好的三重Nano-PCR检测方法可广泛应用于临床诊断和流行病学筛查。