不同日龄鸡的原代肝细胞分离与鉴定

选取不同日龄肉鸡，通过剪碎法和半原位灌流法分别分离1、15、30日龄肉鸡和成年肉鸡原代肝细胞并进行培养。采用油红O染色检测脂滴存在情况，PAS染色检测糖原分泌情况，免疫组织化学法和间接免疫荧光染色法检测肝细胞特异标记物CK18。结果显示，1日龄的鸡原代肝细胞内脂滴过多，15日龄的鸡原代肝细胞状态欠佳，30日龄和成年的鸡原代肝细胞生长状态和形态良好；原代肝细胞内存在大量的脂滴和糖原，免疫组织化学法和间接免疫荧光染色显示分离的细胞为CK18阳性细胞，即为肝细胞。结果表明，30日龄和成年肉鸡采用半原位灌流法分离得到的细胞纯度高、数量多且状态良好，且分离的肝细胞具备分泌糖原和储存脂质的功能，适合进行体外试验研究。