蓝狐兔脑炎微孢子虫夹心ELISA检测方法的建立与应用

本试验旨在建立一种可用于大规模检测蓝狐兔脑炎微孢子虫的夹心 ELISA 方法，使其在疾病早期或隐性感染时，能及早地发现并确诊，从而采取措施。 首先，于病料中初步分离兔脑炎微孢子虫，随后通过革兰染色和 ITS 基因对比验证病原，通过接种犬肾细胞进行纯化。 制定免疫方案，将纯化的兔脑炎微孢子虫以 1×10⁷m L^-1免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。 采用纯化后的多抗作为捕捉抗体，蓝狐 Ig G 作为识别抗体，家兔抗狐 Ig G- HRP 作为指示抗体，通过检测纯化后的微孢子虫建立夹心 ELISA。 研究表明，多抗最适包被质量浓度为 5 μg/ m L,50 g/ L 脱脂奶粉溶液 37 ℃封闭 1 h，待测样本孵育时间为 2 h(37 ℃)，识别抗体质量浓度为 37.5 μg/ m L，反应时间为 1.5 h(37 ℃)，家兔抗狐 Ig G- HRP 工作浓度为 1 ∶ 5 000，孵育时间为 1 h(37 ℃)。本研究建立的夹心 ELISA 对纯化孢子的最低检测浓度为 6.25×10⁵m L^-1，对人工...