基于猪丁型冠状病毒重组蛋白N间接ELISA检测方法的建立与初步应用 |
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作者姓名: | 刘磊 秦毅斌 陈忠伟 赵武 段群棚 全琛宇 赵硕 许心婷 陈婷婷 梁家幸 周英宁 许艺兰 李斌 蒋冬福 卢敬专 何颖 卢冰霞 |
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作者单位: | 1. 广西兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室;2. 广西农业职业技术大学 |
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基金项目: | 玉林市科学研究与技术开发项目(玉市科20220515;玉市科20220516); |
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摘 要: | 为建立快速、准确的猪丁型冠状病毒(PDCoV)抗体ELISA检测方法,本研究以重组蛋白N作为包被抗原,建立了PDCoV间接ELISA抗体检测方法。结果显示,经条件筛选,确定了该ELISA最佳反应条件:重组蛋白每孔包被0.2μg;待检血清1∶80稀释,孵育60 min;酶标二抗1∶4 000稀释,反应30 min;底物显色10 min。待检血清样品S/P值>0.200时判定为阳性,S/P值<0.173时判定为阴性,S/P值介于0.173和0.200之间则判为可疑。特异性试验结果表明,该检测方法不与HCV、FMDV、PRRSV、PRV、TGEV和PEDV的阳性血清发生交叉反应;重复性试验结果显示,批内变异系数为0.79%~4.75%,批间变异系数在1.92%~6.60%之间,表明重复性良好;敏感性试验结果显示,该方法可检测到血清最大稀释度为1∶320。符合率试验结果显示,本方法与中和试验检测结果符合度高,阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为86.36%、96.43%和92.00%。利用本研究建立的ELISA方法对456份采自广西地区不同阶段猪群的血清样品进行检测,结果显示,总...
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关 键 词: | 猪丁型冠状病毒 N蛋白 间接ELISA |
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