基于非洲猪瘟病毒B119L蛋白的间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

为了建立一种针对非洲猪瘟病毒（ASFV）抗体的血清学检测手段，参考ASFV Pig/HLJ/2018株全基因组序列合成非结构蛋白B119L的基因序列，成功构建重组表达质粒pCold-Ⅰ-B119L，将重组质粒转化至大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞，用IPTG诱导表达获得重组蛋白，利用纯化后的B119L重组蛋白作为诊断抗原，建立检测ASFV抗体的间接ELISA检测方法。结果显示：原核表达的B119L蛋白的分子质量为14.4 ku，与预期相符；以其为包被抗原建立的间接ELISA检测方法的批间及批内变异系数均小于10%；标准阳性血清的最低检测稀释度为1︰5 120；对ASFV阳性血清具有特异性，与猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒阳性血清无交叉反应；该间接ELISA方法与商品化试剂盒的符合率为100%。本研究中建立的间接ELISA检测方法特异性、重复性、灵敏度良好，为ASFV的临床检测和流行病学调查提供了依据，对于预防ASFV的感染具有重要作用。