骆驼科动物中东呼吸综合征冠状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

通过PCR扩增中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）RBD基因片段，将其克隆至真核表达载体pCAGGS中，转染哺乳动物细胞Expi293F，并利用带有StrepTrap标签的亲和柱纯化制备MERS-CoV RBD蛋白，利用SDS-PAGE和Western-blot鉴定纯化后的RBD蛋白。以RBD蛋白为包被抗原，建立骆驼科动物MERS-CoV抗体间接ELISA检测方法。结果显示，MERS-CoV RBD蛋白在Expi293F细胞中以分泌形式表达，纯化后RBD蛋白纯度大于95%；成功建立了骆驼科动物MERS-CoV抗体间接ELISA检测方法。将其初步应用于骆驼、羊驼血清抗体的检测，检测结果与已知血清结果相符合。基于真核表达纯化的高纯度MERSCoV RBD蛋白，建立了骆驼科动物MERS-CoV抗体间接ELISA检测方法，为骆驼、羊驼等骆驼科动物的MERSCoV疫苗免疫效果评价、疫病监测等相关研究奠定了基础。